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目的:探讨胍丁胺对严重创伤小鼠肝功能的保护作用及其分子机制研究方法:1.将42只成年BALB/c小鼠按随机数字法分为对照组、模型组、胍丁胺治疗组(双后肢骨折+失血35%+胍丁胺200mg/kg),每组14只。采用双后肢骨折联合眼眶放血35%的方法制备小鼠创伤模型。胍丁胺组于制模后非限制性复苏时腹腔注射胍丁胺200 mg/kg;模型组给予等量生理盐水;对照组仅麻醉小鼠,不进行其他处理。各组于制模后12 h、24 h分别处死7只小鼠,取血和肝组织。2.自动生化分析仪测定血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)水平;苏木素-伊红(HE)染色后观察肝组织病理学变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清及肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)的含量。3.制模后的各组小鼠,各自分离并培养Kupffer细胞,ELISA法检测Kupffer细胞上清中TNF-α、IL-6含量,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Kupffer细胞中TNF-α和IL-6的mRNA表达,Western Blot检测Kupffer细胞胞浆NF-κB相关蛋白的表达,ELISA检测Kupffer细胞NF-κBp65DNA结合力。结果:1.对照组肝组织结构正常;模型组制模后24 h可见中性粒细胞浸润,肝细胞肿胀、充血、坏死,且肝功能指标出现明显异常;而胍丁胺能明显改善上述病理学变化,改善肝功能。2.制模后12h,3组小鼠肝组织TNF-α和IL-6水平均无明显差异;制模后24 h,模型组肝组织TNF-α、IL-6水平较12 h时升高,且均显著高于对照组,而胍丁胺能有效降低创伤小鼠肝组织TNF-α、IL-6水平[TNF-α(ng/mg):248.7±22.5比405.2±19.6,IL-6(ng/mg):22.5±3.1比58.4±7.7,均P<0.01);且制模后24h,模型组血清TNF-α、IL-6较对照组显著升高,而胍丁胺能有效降低创伤小鼠血清TNF-α、IL-6水平[TNF-α(ng/l):58.2±3.1比80.8±4.7,IL-6(ng/l):74.1±6.6比104±9.0,均P<0.01)3.模型组体外培养Kupffer细胞中TNF-α和IL-6水平均较对照组明显升高,而胍丁胺可显著降低TNF-α和IL-6水平[TNF-α(ng/mL):50.4±4.8比91.2±3.6,IL-6(ng/mL):386.2±24.6比609.5±23.5,均P<0.01],并下调TNF-α和IL-6的mRNA表达[TNF-α:4.3±0.3比8.7±0.4,IL-6:3.2±0.3比6.7±0.5,均P<0.01)。创伤失血模型后24h分离出的Kupffer细胞,体外培养约2.5h,此时NF-κB信号通路激活,在模型中我们发现IκB发生磷酸化并降解,p65磷酸化后入核,而胍丁胺组,IκB的磷酸化被明显抑制,IκB的降解也减少,从而抑制了NF-κB p65的磷酸化和入核。Kupffer细胞进行核内NF-κBp65的DNA结合活力检测,我们发现,模型组NF-κB p65与DNA的结合显著增多,而胍丁胺组,NF-κB p65的DNA结合活力明显降低。结论:1.胍丁胺能够明显降低严重创伤小鼠血清中ALT、AST、LDH的水平,改善肝脏的病理学变化。2.胍丁胺能够抑制严重创伤小鼠血清及肝组织中炎性因子TNF-α、IL-6的产生,减轻肝脏损伤。3.胍丁胺对体外培养的Kupffer细胞炎性因子TNF-α、IL-6的分泌具有明显的抑制作用,并下调其mRNA的表达。胍丁胺通过抑制Kupffer细胞NF-κB信号通路的激活,减少其炎症因子的分泌,从而减轻肝功能的损害。