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本研究采用免疫组织化学的方法检测分化型甲状腺癌组织中的Survivin、VEGF、CD34蛋白的表达,旨在探讨Survivin在甲状腺癌组织中的表达,与VEGF、微血管形成的关系,以及与临床生物学行为和病理因素的关系,为甲状腺癌的诊断和治疗提供新的线索。
研究方法:选择1997年10月-2002年12月在白求恩国际和平医院病理存档的甲状腺肿瘤组织石蜡标本共47例,术前均未进行化学治疗和放射治疗。其中男13例,女34例,年龄18-66岁,病理分型:乳头状腺癌34例,滤泡状腺癌13例,临床分期:Ⅰ期30例,Ⅱ期9例,Ⅲ期8例,采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶连接法(SP法)检测Survivin、VEGF、CD34蛋白在47例分化型甲状腺癌、10例甲状腺腺瘤、10例正常甲状腺组织中的表达,计算其平均瘤内微血管密度(MVD)。标记抗体:第一抗体分别为兔抗人Survivin、鼠抗人VEGF和CD34单克隆抗体,第二抗体为羊抗兔IgG抗体。统计学分析:计量资料采用两样本均数比较的T检验、计数资料用单因素x2检验及Fisher精确检验和相关回归等方法进行统计分析。
研究结果:
1.Survivin蛋白主要表达在分化型甲状腺癌的胞浆中,呈棕黄染色,部分同时表达在肿瘤细胞胞核内。47例分化型甲状腺癌中Survivin蛋白的阳性表达率为46.8%(22/47)。而在正常甲状腺组织及腺瘤组织中无Survivin蛋白的表达(0/10,0/10),比较有非常显著性差异(Fisher精确检验,P<0.01)。病理图象分析测定分化型甲状腺癌肿瘤细胞Survivin的含量,其OD值为126.02±5.21,与正常甲状腺及腺瘤细胞的Survivin含量相比有非常显著性差异(P<0.05)。
2.VEGF蛋白主要表达在分化型甲状腺癌组织细胞的胞浆中,呈棕黄染色,47例分化型甲状腺癌中VEGF的阳性表达率达61.7%(29/47)。病理图象分析测定VEGF的含量,OD值为123.55±5.21。对分化型甲状腺癌组织细胞Survivin的含量与VEGF的含量进行相关回归分析,显示两者具有显著相关性(P<0.05)。
3.用抗CD34单抗免疫组织化学染色显示肿瘤内的微血管密度,47例甲状腺癌MVD值从49±124,平均为80.94±16.86。对分化型甲状腺癌组织细胞Survivin的含量与MVD值进行相关回归分析,显示两者具有显著相关性(P<0.05)。
4.用T检验分析47例分化型甲状腺癌患者的Survivin蛋白表达的细胞含量与临床因素的相关性,结果显示Survivin蛋白表达与患者年龄(P=0.067)、性别(P=0.651)、肿瘤大小(P=0.108)无关,与临床分期(P=0.001)有关。
5.在47例分化型甲状腺癌患者的Survivin蛋白表达与病理学因素的相关性分析中,Survivin蛋白表达与分化型甲状腺癌的病理分型无关,与肿瘤包膜完整与否及颈部淋巴结转移密切相关,在颈部淋巴结转移组Survivin蛋白检测的OD值为123.95±5.28,与无颈部淋巴结转移组(128.82±3.65)相比具有显著性差异。
研究结论:
1.Survivin蛋白在分化型甲状腺癌中存在高表达,而在甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中不表达。
2.Survivin蛋白在甲状腺癌中的表达与VEGF、微血管密度具有密切的关系,提示Survivin可能是肿瘤血管形成过程中生长因子诱导的保护性基因,在肿瘤血管形成过程中发挥重要的抗凋亡作用。
3.Survivin蛋白的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小及病理分型无关,与肿瘤临床分期及病理特征有关,并随肿瘤临床分期升高及颈部淋巴结转移的出现而呈升高趋势,证明Survivin的表达在分化型甲状腺癌的发生、发展及转移过程中发挥重要的抗凋亡作用。