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目的:动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一种血脂异常导致血管壁重构的疾病。其中血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）的表型转化、增生,及向内膜迁移并吞噬脂质是AS血管壁增厚的重要病理基础。缝隙连接蛋白43（Connexin43,Cx43）是构成VSMC间缝隙连接的主要Cxs,近来研究发现,Cx43参与促进血管平滑肌的表型转换、迁移及增殖过程,具有加速AS血管病变作用。吴茱萸次碱（Rutaecarpine,Rut）是传统中药吴茱萸的主要活性成分,其可激活辣椒素受体（Transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）产生多种的心血管保护效应。我们课题组的前期研究在大鼠VSMC细胞株A7r5上发现,Rut可抑制Ox-LDL诱导的Cx43表达,进而抑制VSMC增殖,其机制与激活TRPV1有关。本课题在原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞上进一步观察Rut对Ox-LDL诱导的VSMC表型转化及迁移的影响,并深入探讨其抑制Cx43表达的作用是否通过TRPV1/[Ca2+]i途径抑制Ox-LDL诱导的NF-κB激活。方法:（1）原代培养VSMC:采用组织块贴壁法培养原代大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞免疫组化α-SMA进行血管平滑肌细胞鉴定,取410代细胞进行实验。（2）Rut对Ox-LDL诱导的VSMC迁移和表型转化的影响:采用Ox-LDL（50mg/L）孵育VSMC,预先给予不同浓度的Rut（1μmol/L,3μmol/L,10μmol/L）处理细胞,给予TRPV1阻断剂Capsazepine（10μmol/L）确定Rut的效应是否涉及TRPV1途径,Cx43特异性拮抗剂Gap26（100μmol/L）确定Cx43对血管平滑肌迁移和表型转化的影响。Western blot检测VSMC收缩型标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白（α-SMA）和调宁蛋白（Calponin）的表达,以确定平滑肌细胞表型变化;划痕愈合实验及Transwell小室检测VSMC迁移。（3）明确Rut是否通过TRPV1/[Ca2+]i信号通路抑制Cx43的表达:在Ox-LDL孵育的VSMC上给予Rut,预先给予TRPV1阻断剂Capsazepine（CAPZ,10μmol/L）、胞内钙螯合剂BAPTA-AM（10μmol/L）或钙调蛋白阻断剂W-7（10μmol/L）,Western blot检测Cx43的表达;荧光显微镜和荧光酶标仪检测Rut对胞内钙的影响。（4）Rut对Ox-LDL诱导的NF-κB激活的影响:Ox-LDL孵育VSMC细胞不同时间点（2h,4h,8h,12h和24h）提取核蛋白,Western blot检测核蛋白p65水平确定NF-κB激活时间点。在此基础上给予Rut,及Capsazepine（10μmol/L）、胞内钙螯合剂BAPTA-AM（10μmol/L）或钙调蛋白阻断剂W-7（10μmol/L）,Western blot检测核蛋白p65的表达。结果:Western blot结果显示,Ox-LDL可显著抑制VSMC中α-SMA和Calponin表达,说明VSMC由收缩型向合成型转化,而Rut可恢复两种收缩型标志蛋白的表达,在浓度为3μmol/L时效果最显著,其效应可被TRPV1阻断剂CAPZ所阻断。划痕愈合实验及Transwell小室结果显示Rut可呈剂量依赖性的抑制Ox-LDL诱导的VSMC的迁移,该效应可被CAPZ所取消。此外,Cx43的特异性阻断剂Gap26能使α-SMA和Calponin的表达升高,并抑制Ox-LDL诱导的VSMC的迁移。这些结果提示,Cx43参与调节Ox-LDL诱导的VSMC的表型转换和迁移,Rut通过TRPV1通路抑制VSMC表型转化和迁移。（2）Western blot结果显示,Rut可显著抑制Ox-LDL诱导的Cx43表达上调。TRPV1阻断剂CAPZ、胞内钙螯合剂BAPTA-AM和钙调蛋白阻断剂W-7均可取消Rut对Cx43的抑制效应;荧光显微镜或荧光酶标仪结果显示,10μmol/L Rut能显著促进钙离子向细胞内流动。这些结果提示,Rut可通过激活TRPV1/[Ca2+]i信号通路抑制Cx43的表达。（3）我们实验室的前期研究发现,Ox-LDL诱导的Cx43表达升高可被NF-κB的特异性阻断剂所阻断,提示Ox-LDL通过激活NF-κB上调Cx43的表达。本实验Western blot时效结果显示,Ox-LDL孵育VSMC 8h时NF-κB p65水平显著升高,说明Ox-LDL能显著促进NF-κB核转位;Western blot结果显示加入Rut后,p65表达降低,而加入CAPZ、BAPTA-AM和W-7可取消这一效应。这些结果提示,Rut通过TRPV1/[Ca2+]i途径抑制Ox-LDL诱导NF-κB激活,从而抑制Cx43表达上调。结论:吴茱萸次碱可抑制Ox-LDL诱导血管平滑肌细胞表型转化和迁移,其机制与通过TRPV1/[Ca2+]i/NF-κB信号途径,抑制Cx43表达上调有关。