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Wnt蛋白家族是一类通过自分泌、旁分泌途径激活不同的Wnt信号通路的信号糖蛋白,Wnt介导的信号通路在动物的生长发育过程中广泛的存在并起重要的调节作用。近期完成的水螅核基因组测序项目结果显示,水螅也具有一系列脊椎动物Wnt基因的同源基因。许多证据表明高等动物Wnt蛋白家族中的Wnt-3蛋白直接参与动物胚胎发育早期体轴的决定和形成过程的调节,因此我们选择以水螅Wnt-3基因为突破口,研究Wnt蛋白在水螅极性体制的决定及形成过程中作用角色。基于此,本研究围绕大乳头水螅Wnt-3基因进行了以下实验工作: 1.提取大乳头水螅总RNA,采用SMART技术制备大乳头水螅RACE cDNA文库,再以该文库为模板扩增了大乳头水螅Wnt-3基因cDNA序列,PCR产物纯化后与克隆载体pMD-18T连接,转化E.coli JM109菌株。运用菌落PCR方法鉴定阳性克隆后进行DNA测序,测序结果表明大乳头水螅Wnt-3基因cDNA序列编码区全长序列为1089个核苷酸,编码363个氨基酸。大乳头水螅Wnt-3基因cDNA序列的成功克隆为深入探讨Wnt-3基因的分子进化及水螅Wnt-3蛋白的生理功能奠定了基础。 2.基于原核表达质粒pET-LT多酶切位点的特点设计引物,以已克隆获得的pMD18-T-Wnt-3重组质粒为模板,PCR扩增大乳头水螅Wnt-3基因片段(编码区cDNA序列的第4位点至867位点),再把该基因片段的PCR产物纯化后连接到原核表达质粒pET-LT上,构建重组表达载体pET-LT-Wnt-3,转化E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE胶检测结果表明本实验成功表达了重组水螅Wnt-3蛋白,该重组蛋白的主要存在形式为可溶性蛋白质。本实验获得的重组水螅Wnt-3蛋白将有助于后续制备Wnt-3蛋白的抗体及利用分子免疫方法研究Wnt-3蛋白在水螅体内的表达模式和表达动态等科研工作的开展。