【摘 要】
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背景与目的:克罗恩病（Crohn’s disease,CD）是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病,其病因和发病机制尚不清楚,肛瘘是克罗恩病的主要并发症,是目前亟待解决的难题。开发新疗法需要一种理想的动物模型,能够在炎症的直肠粘膜上建立持续性的肛瘘。本实验的目的是改进结肠炎的诱导方法,建立一种可靠且可重复的克罗恩病肛瘘的动物模型,用以评估新的治疗策略。方法:选择体重约2.0kg的雄性新西兰兔20只,随机
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背景与目的:克罗恩病（Crohn’s disease,CD）是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病,其病因和发病机制尚不清楚,肛瘘是克罗恩病的主要并发症,是目前亟待解决的难题。开发新疗法需要一种理想的动物模型,能够在炎症的直肠粘膜上建立持续性的肛瘘。本实验的目的是改进结肠炎的诱导方法,建立一种可靠且可重复的克罗恩病肛瘘的动物模型,用以评估新的治疗策略。方法:选择体重约2.0kg的雄性新西兰兔20只,随机分为3组,A、B两组各9只为干预组,C组2只为对照组。使用2,4,6-三硝基苯磺酸溶液（2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid solution,TNBS）50 mg/kg,溶于50%乙醇配成灌肠液,用于诱导结肠炎。干预组使用不同剂量的TNBS混合液,每周进行1次灌肠,直至完成3周的连续灌肠给药。其中,A组采用改良的等组距小剂量递增法给药,B组每周混合液剂量不变;对照组C组动物不做处理。首次灌肠给药7天后,对干预组进行肛瘘手术,造瘘手术后,每7天从A组和B组中各随机选择3只动物,取出肛周手术线并进行肛周超声内镜（endoscopic ultrasonography,EUS）评估以证明瘘管的存在。直到第28天,所有动物的手术线均被从肛周取出。在实验开始后,每7天对实验兔进行1次肠道内窥镜检查,并在结肠病变明显处使用活检钳夹取组织进行病理学分析。每7天对各干预组动物进行一次评分记录,包括结肠宏观损伤指数（colonic macro injury index,CMDI）、组织损伤指数（tissue injury index,TDI）、疾病活动指数（disease activity index,DAI）。最后,在取线时和取线后第7天对各亚组进行肛周超声内镜检查,评估瘘管形成及愈合情况。结果:与B组相比,A组动物的DAI评分在第21天时增加是不明显的（8.00±2.00 vs.8.25±2.25,P=0.81）,第28天时增加是明显的（7.78±1.56 vs.5.75±1.67,P=0.02）。A组动物的内窥镜及病理学评分在第7天时是弱于B组的（1.11±0.78 vs.2.88±1.13,P=0.002;1.44±0.88 vs.3.50±0.93,P＜0.001）,然而,在第21天时明显增加（3.89±0.93 vs.1.63±0.92,P＜0.001;4.11±0.78 vs.1.88±0.99,P＜0.001）,差异有统计学意义。这表明A组的建模方法优于B组。肛瘘手术1周后,所有干预组动物的肛周均出现肉眼可见的瘘管内口及外口。其中,改良的等组距小剂量递增法给药的A组中,持续挂线时间为21天的动物获得了最佳的实验模型。在该组中,取出手术线后的第7天,所有动物在EUS成像上均可见持续性的管腔,显示为连续的全层高信号。然而其他组动物发生了不同程度的瘘管愈合。瘘管周围组织的病理检查表现为邻近直肠的急性和慢性炎症、纤维化、上皮形成和周围炎症。结论:我们成功建立了克罗恩病肛瘘的兔模型,并改良了克罗恩病结肠炎动物模型的建模方法。该模型可以模拟克罗恩病的人体环境,通过内窥镜、EUS和病理检查对肛瘘病变进行评估,从而评估新的治疗策略。
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