结核分枝杆菌是人类重要的致病细菌,可导致结核病。Rv3368c是结核分枝杆菌H37Rv中的一种硝基还原酶。Rv3368c硝基还原酶是一类以FMN为辅基而且依赖NADPH的黄素蛋白,能够将含有硝基基团的底物进行还原,在生物修复和前药激活方面具有良好的应用前景。我们利用NCBI提供的Rv3368c基因序列设计引物,将大肠杆菌进行PCR扩增获得目的基因后,将其克隆到PSUMHO载体上,转化到BL21(DE3)大肠杆菌中,经过对表达纯化条件优化,获得重组蛋白。我们利用硒代甲硫氨酸的方法首次获得Rv3368c蛋白的结构,并通过ITC结合实验验证Rv3368c和小分子FMN有较强的结合,通过浸泡实验得到了 Rv3368c-FMN的复合物结构。进而与FMN结合相关残基的突变进行分析,确定了 18Arg、157Trp、202Arg残基对FMN结合的重要性。BTZ043是一种新型的的治疗结核病的药物,通过酶活实验验证Rv3368c可以对底物BTZ043进行作用催化。虽然Rv3368c的生物学功能和催化机制还需要进一步探索,但ITC结合实验和酶活实验在帮助我们理解Rv3368c的工作机制中是非常有意义的。