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目的:在体外,观察高糖(high glucose,HG)环境下人肾小球系膜细胞(human glomerular mesangial cells,HMCs)的损伤情况及其黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)的防治作用、研究AS-Ⅳ对HMCs损伤的保护作用及其可能机制,观察Nrf2信号通路在其中的调节作用。探讨糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的可能发病机制,为该疾病的防治提供新理论、作用靶点和为新药提供理论依据。方法:1.将常规培养的HMCs随机分为以下2组:(1)正常(NG)组、(2)高糖(HG)组,将各组细胞培养至规定时间(12 h、24 h、36 h、48 h、72 h)后,利用MTT方法检测其增殖情况。2.将常规培养的HMCs随机分为6个时间点组:(1)NG组,(2)HG 6 h组,(3)HG 12 h组,(4)HG 24 h组,(5)HG 36 h组,(6)HG 48 h组。采用实时荧光定量PCR(q PCR)和Western blot方法检测各组细胞的Nrf2、HO-1、i NOS、ICAM-1 m RNA及其蛋白的表达水平,采用试剂盒检测方法检测HMCs上清液中H2O2与MDA含量变化及T-SOD和GSH-Px活性变化情况。3.将常规培养的HMCs随机分为以下6组:(1)NG组,(2)HG组、(3)HG+AS-Ⅳ10(μmol/L)组,(4)HG+AS-Ⅳ25(μmol/L)组,(5)HG+AS-Ⅳ50(μmol/L),(6)HG+AS-Ⅳ100(μmol/L)组,各组均干预48 h。采用MTT法检测各组细胞的增殖情况,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测各组细胞的Nrf2、HO-1、i NOS、ICAM-1 m RNA及其蛋白的表达水平,采用试剂盒检测HMCs上清液中H2O2与MDA含量变化及T-SOD和GSH-Px活性变化情况。结果:1.MTT方法结果显示,与正常(NG)组比较,高糖环境下HMCs呈过度增殖趋势;不同浓度AS-Ⅳ干预48 h后,与HG组比较,各给药组明显的抑制了高糖环境下HMCs过度增殖且呈剂量依赖性。2.q PCR及Western blot方法结果显示,与NG组比较,不同时间点时组微弱的增加了Nrf2 m RNA及蛋白表达水平,HO-1 m RNA及蛋白表达水平在12 h和24 h时增加,在随后的36 h和48 h时又降低至正常的表达水平,增加了i NOS与ICAM-1 m RNA及蛋白表达水平;不同浓度AS-Ⅳ干预48 h后,与HG组比较,各给药组明显的增加了Nrf2、HO-1 m RNA及蛋白表达水平,减少了i NOS与ICAM-1 m RNA及蛋白表达水平。3.各试剂盒检测结果显示,与NG组比较,不同时间点时组明显的增加了细胞上清液中H2O2、MDA的含量,降低了细胞上清液中T-SOD、GSH-Px的活性;不同浓度AS-Ⅳ干预48 h后,与HG组比较,各给药组显著的降低了细胞上清液中H2O2、MDA的含量,增加了细胞上清液中T-SOD、GSH-Px的活性。结论:AS-Ⅳ可能通过调控抗氧化应激Nrf2信号通路(包括Nrf2、HO-1 m RNA及其蛋白表达水平),下调i NOS、ICAM-1 m RNA及其蛋白表达水平,降低高糖环境下HMCs上清液中H2O2、MDA的含量以及增加T-SOD、GSH-Px的活性,从而抑制了高糖环境下HMCs过度增殖减缓了DN的进程。