多梳蛋白CBX家族成员间的分子互作初步研究

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多梳蛋白家族(Polycomb Group,PcG)是一类重要的表观遗传调控因子,主要参与维持特定基因的转录沉默,与多种干细胞的干性维系、细胞分化、细胞周期的调控、细胞衰老、X染色体失活、基因印记、癌症的发生发展等一系列细胞生理及病理活动密切相关。PcG蛋白主要形成PRC1和PRC2(Polycomb Repressive Complexes 1和2,PRC1/PRC2)两类多梳蛋白抑制复合体,它们彼此相互协同调控基因的表达。其中Chromobox同源蛋白即CBX蛋白作为PRC1复合体的核心组分协助招募并稳定PRC1到染色质的特定区域。在哺乳动物中,CBX蛋白家族包含五个成员,它们在结构和功能方面既有共性又有特性。本课题主要通过双分子荧光互补实验(BiFC)系统研究了CBX家族成员间的分子互作关系,并对鼠源CBX7的一种未知功能的转录剪接体的表达进行了检测和初步研究。结果表明:(1)BiFC实验证明CBX2与CBX7、CBX2与CBX4以及CBX2自身之间存在一定程度的相互作用;(2)利用缺失不同区段的CBX蛋白突变体进行BiFC实验,结果揭示CBX2与CBX7之间的互作位点位于CBX7蛋白的ATHL结构域中;(3)以小鼠脾脏组织cDNA样品为材料,成功克隆得到了与UCSC数据库中序列完全匹配的mCbx7 C剪切体的编码序列,并且进一步制备了mCBX7 C的特异性多克隆抗体,Western Blot初步检测到了该剪切体的蛋白产物。本课题的研究为进一步解释在胚胎干细胞增殖与分化过程中不同CBX蛋白共存的方式及意义奠定了基础。另外对CBX蛋白剪接体的结构与功能研究对揭示其在表观遗传调控中的作用机制提供依据。此外,进一步阐明每种CBX蛋白在胚胎发育等生理过程中的特殊分工,将十分有助于解释其失稳后导致的发育缺陷及肿瘤形成的致病机理,为未来相关疾病的早期诊断、治疗和预后检测提供新的有效靶点。
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