高压微射流均质法制备DHA藻油脂质体及其稳定性研究

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二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)具有预防心血管疾病、促进大脑发育、缓解阿尔茨海默病等生理功能。藻油中的DHA主要以甘油三酯型存在,具有代谢吸收率高、生物利用率高、稳定性强及安全性好等优势。但DHA藻油存在易氧化、溶解性差、应用受限等问题,严重影响了其功能的发挥,限制了其在食品加工中的使用。脂质体是一种良好的生物载体,具有双亲性、靶向性、长效性等优势。本研究通过薄膜分散-高压微射流均质技术将DHA藻油制备成脂质体,旨在延长DHA藻油的贮藏稳定性,改善溶解性,提高加工利用率。首先,对DHA藻油脂质体的制备工艺进行了研究。以平均粒径、包封率为评价指标考察了大豆磷脂的浓度、磷脂与DHA藻油的质量比、磷脂与胆固醇的质量比、吐温-80用量、高压微射流均质压力、均质次数共六项因素对DHA藻油脂质体的影响。在单因素实验的基础上,通过三因素三水平响应面优化试验建立了回归模型,二次多项回归方程拟合为:Y=91.39+14.40A-5.92B-7.40C-0.7875AB+5.90AC+3.39BC-1.45A~2-11.64B~2-9.18C~2,R~2=0.9780。得到最佳制备工艺参数:大豆磷脂浓度20 mg/m L,磷脂与DHA藻油的质量比4:1,磷脂与胆固醇的质量比11.9:1,吐温-80含量为大豆磷脂质量的15%,高压微射流均质压力138 MPa,均质次数5次。在此条件下,验证实验得到的结果为:平均粒径为(59.35±3.05)nm,PDI为0.189±0.025,包封率为(94.2±2.9)%,zeta电位为(-37.7±2.5)m V。其次,分析及评价了脂质体的形态和稳定性。即通过透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)观察DHA藻油脂质体的微观结构为球状,分布均匀。在与未经高压微射流均质处理脂质体的对比下,通过差示扫描量热法(Differential Scanning Calorimetry,DSC)分析,发现高压微射流均质处理有效的提高了脂质体的相变温度。稳定性分析实验表明,经该技术处理过的DHA藻油脂质体具有良好的物理稳定性、贮藏稳定性、氧化稳定性、离子强度稳定性、p H强度稳定性,且低温条件更有益于脂质体功能的发挥。最后,对DHA藻油脂质体的体外胃肠消化稳定性进行了研究。测定了平均粒径、zeta电位的变化。从初始阶段到胃消化阶段再到肠消化阶段,经高压微射流均质处理脂质体的平均粒径整体呈现增加的趋势,zeta电位绝对值呈现先减小后增大的规律。采用共聚焦激光扫描显微镜(Confocal Laser Scanning Microscope,CLSM)观察脂质体微观结构的变化情况,结果显示经高压微射流均质技术处理过的脂质体具有较强的稳定性。通过模拟体外消化实验,研究了DHA藻油脂质体的释放行为,结果显示脂质体在胃消化中结构保持完整,在肠消化中进行释放,表现出良好的释放性能。对DHA藻油脂质体进行了零级方程、一级方程、Higuchi方程、Ritger-peppas方程拟合,明确了其扩散机制,符合Fickian扩散。
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