【摘 要】
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目的:（1）对瑶药苦赖咪中总醌提取物进行提取和含量测定。（2）研究苦赖咪中总醌提取物体外抑制人肝癌细HepG2增殖以及迁移的作用。（3）研究苦赖咪总醌提取物体外诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡作用。（4）探讨苦赖咪总醌提取物诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制。方法:（1）瑶药苦赖咪中总醌提取物的提取:药材采用醇提再酸碱处理后经有机溶剂萃取的方法获得瑶药苦赖咪的总醌提取物,采用分光光度法对提取物中总醌提
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目的:（1）对瑶药苦赖咪中总醌提取物进行提取和含量测定。（2）研究苦赖咪中总醌提取物体外抑制人肝癌细HepG2增殖以及迁移的作用。（3）研究苦赖咪总醌提取物体外诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡作用。（4）探讨苦赖咪总醌提取物诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制。方法:（1）瑶药苦赖咪中总醌提取物的提取:药材采用醇提再酸碱处理后经有机溶剂萃取的方法获得瑶药苦赖咪的总醌提取物,采用分光光度法对提取物中总醌提取物进行含量测定。（2）研究苦赖咪中总醌提取物的在体外抑制人肝癌细HepG2增殖以及迁移的作用:（1）采用CCK8法检测总醌提取物对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖作用:苦赖咪总醌提取物制备成12.5、25、50、100、200μg/ml五个不同浓度的溶液,对HepG2细胞干预24h,采用CCK8法检测各浓度的体外增殖抑制率,计算出苦赖咪中总醌提取物对HepG2细胞干预24h的LD50。（2）克隆形成实验检测细胞增殖活力:苦赖咪总醌提取物稀释成50、100μg/ml,加入到6孔细胞培养板相应细胞孔中对HepG2细胞干预24h后更换培养基,继续培养10 d,观察克隆形成及大小,直至出现肉眼可见克隆时终止培养。清洗、固定后吉姆萨染色,晾干后显微镜下记录大于50个细胞的克隆数。（3）划痕实验检测细胞的迁移能力:加入50、100μg/ml苦赖咪总醌提取物溶液后,使用划痕枪划出“伤口”拍照比较0小时和24小时各浓度提取物下的细胞迁移率。（3）苦赖咪总醌提取物稀释成50、100μg/ml,加入到细胞培养板相应细胞孔中对爬片HepG2细胞干预24h,Tunel荧光染色法检测HepG2细胞凋亡情况。（4）探讨总醌提取物对人肝癌细胞HepG2诱导凋亡的机制:q-PCR法检测苦赖咪总醌提取物对肝癌HepG2细胞基因肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素（IL-8）基因表达水平的情况。结果:（1）醇提再酸碱处理及有机溶剂萃取的方法获得的苦赖咪总醌提取物含量可达52.31%。（2）（1）苦赖咪总醌提取物对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用呈浓度依赖性,随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强,药物作用24h的半数抑制浓度IC50为82.16±3.57μg/ml。（2）苦赖咪总醌提取物可显著抑制细胞的克隆作用,抑制作用呈浓度依赖性（P＜0.01）。（3）苦赖咪总醌提取物能明显抑制HepG2细胞的迁移率,差异有统计学意义（P＜0.01）。（3）苦赖咪总醌提取物干预24h可促进人肝癌HepG2细胞的凋亡,增加人肝癌HepG2细胞的凋亡率,作用效果与药物浓度呈正相关系,差异有统计学意义（P＜0.01）。（4）q-PCR结果可见苦赖咪总醌提取物（100μg/ml）能够显著上调人肝癌HepG2细胞的TNF-α、下调IL-8基因的表达。结论:（1）醇提再酸碱处理后经有机溶剂萃取法可用于瑶药苦赖咪总醌提取物的提取,该方法操作方便,所得总醌含量稳定,但尚可后续对提取纯化流程进行优化,以期达到更优的提取率和纯化度。（2）瑶药苦赖咪的总醌提取物能够抑制人肝癌HepG2细胞体外增殖、迁移和克隆,通过参与调节人肝癌HepG2细胞TNF-α、IL-8基因表达诱导其凋亡。
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