目的探讨NSC-34细胞转染TDP-43-M337V后对细胞内ROCK/PTEN信号通路的影响。方法1、细胞培养:将空转型、野生型和突变型三株NSC-34细胞系从液氮中分别取出,接种于25 cm2玻璃培养瓶中,置于37℃、5%CO2条件的培养箱内进行复苏、培养和传代。2、利用免疫组化方法来观察转染细胞的形态变化;3、细胞氧化损伤的程度通过检测细胞内丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量来反应;4、通过MTT检测转染基因对NSC-34细胞活性的影响;5、通过应用Western blots法来检测各组细胞中ROCK/PTEN信号通路下游相关分子在蛋白水平上的表达差异;6、通过ROCK活性检测试剂盒来检测ROCK活性,以观察在该信号通路中ROCK活性的变化。结果1、转染p DEST30-EGFP-TDP-43-M337V质粒的细胞与转染p DEST30-EGFPTDP-43-wt和p DEST30-EGFP质粒组细胞相比,胞体变圆,突起减少,且轴突变短;经过细胞内MDA含量检测发现,突变的细胞内MDA含量明显高于其它两组细胞(P<0.05);同时,经过MTT检测发现,转染p DEST30-EGFP-TDP-43-M337V组细胞抑制率显著升高(P<0.05)。2、Western blots发现,在转染不同组别的ALS细胞中,ROCK1、ROCK2、PTEN、Akt总蛋白表达水平无明显差异(P>0.05);转染p DEST30-EGFP-TDP-43-M337V组细胞与转染p DEST30-EGFP质粒组细胞相比,p-PTEN的蛋白表达显著增加,而p-Akt的蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。而转染p DEST30-EGFP-TDP-43-wt质粒的细胞与转染p DEST30-EGFP质粒组细胞相比,pPTEN和p-Akt的蛋白表达水平无显著差异(P>0.05)。3、ROCK活性检测发现,突变的TDP-43-M337V细胞与空转组及野生组细胞相比,ROCK活性无明显变化。结论转染人TDP-43-M337V降低了NSC-34细胞的活性及其抗氧化损伤能力,增加了运动神经元在应激诱导毒性损伤中的易损性。TDP-43-M337V对NSC-34细胞ROCK的活性及其蛋白表达无明显影响,但是可以使PTEN和Akt的磷酸化水平改变,据此我们推测,转染人突变TDP-43基因可能是从不同的机制或通过不同的途径激活了细胞凋亡信号通路,进而诱导细胞凋亡。