干扰串珠素表达对硬膜外瘢痕细胞中Ⅰ型胶原蛋白生成的影响

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目的通过减少椎板切除术后硬膜外瘢痕主要成分Ⅰ型胶原蛋白的生成来实现抑制椎板切除术后硬膜外瘢痕的形成。方法选用30只250克两月鼠龄的SD雄性大鼠随机按1、2、3、4、5、6周分为6组,行后路4、5腰椎全椎板切除术。术后1、2、3、4、5、6周时每周取一组大鼠全锥板切除术后硬膜后方瘢痕组织,分别行病理切片HE染色,组织块贴壁法细胞培养。筛选第三周瘢痕组织培养的成纤维细胞进行慢病毒干扰串珠素表达并设对照组,通过Western-blot、RT-PCR分析Ⅰ型胶原蛋白生成量与对照组的差别并进行统计学分析。结果术后1周,局部炎症反应,可见组织间隙增宽水肿,大量炎性细胞浸润。2、3周的瘢痕组织中细胞增殖分化明显,成纤维细胞活性高,形态好。4周组,胶原沉积,毛细血管生成,肉芽组织大量生成。5、6周瘢痕中成纤维细胞减少,肌成纤维细胞增多,大量胶原沉积,肉芽组织转化为致密的瘢痕组织。慢病毒干扰小组Ⅰ型胶原蛋白生成量较对照组及纯病毒组明显减少(RT-PCR F=509.331;g A,B=-43.371,P<0.01;q A,C=-46.133, P<0.01;Western-Blot F=337.578; q A,B=-112.433,P<0.01;q A,C=-89.227,p<O.01)。结论通过慢病毒介导的shRNA干扰成纤维细胞中的串珠素后,其生成的Ⅰ型胶原蛋白量与对照组相比较有显著差异且此差异有统计学意义,说明通过抑制瘢痕成纤维细胞的串珠素表达能够有效减少Ⅰ型胶原蛋白的生成。这种方法不论从Ⅰ型胶原蛋白是瘢痕主要构成成分方面,还是Ⅰ型胶原蛋白在瘢痕生成过程中分泌胶原中占得比例增多导致机体由胎儿期的无瘢痕愈合转化至成体的瘢痕愈合这个方面来讲,理论上都能够做到有效的抑制、减少硬膜外瘢痕的形成,因此通过干扰硬膜外成纤维细胞串珠素表达从而达到抑制硬膜外瘢痕的形成这一理论是可行的。
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