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目的在选定核干因子(NS)作为“靶基因”的基础上,应用RNA干扰技术,通过建立一种能够在体内和体外将干扰质粒有效、靶向导入前列腺癌细胞的非病毒载体系统,并使干扰片断在前列腺癌细胞中特异性表达,沉默特定癌基因,从而为治疗前列腺癌提供实验基础和理论依据。方法通过构建靶向基因转移非病毒载体Tf-PEG-PEI,分别以PEI和Tf-PEG-PEI将pEGFP-C1质粒及构建的以PSMAe/p为驱动序列的EGFP干扰质粒转入体外培养高表达PSMA的人前列腺癌细胞系LNCap中,通过荧光显微镜观察各组荧光表达,并应用实时定量PCR(real time PCR)和western blot检测EGFP基因和蛋白表达变化,并以不表达PSMA的人前列腺癌细胞系PC-3、不表达PSMA的人膀胱癌细胞系T24及人胚肾HEK293进行对照实验,从而证实PSMAe/p驱动干扰片断的细胞特异性和Tf-PEG-PEI高效靶向基因转移的能力。以功能基因shNS更换EGFP干扰质粒pPSMAe/p-shEGFP-poly(A)质粒中的shEGFP,重构针对NS的干扰质粒,利用LNCaP及PC-3进行细胞实验,以Tf-PEG-PEI为载体将质粒转入细胞,检测细胞的形态、生长情况以及NS基因和蛋白的变化,进一步证实PSMAe/p驱动干扰片断的细胞特异性及Tf-PEG-PEI的高效基因转移能力。从而为后续的研究提供必要的体外细胞实验依据和理论基础。结果荧光显微镜测定结果显示：干扰质粒与pEGFP-C1质粒共转染LNCaP细胞后,分别以PEI及Tf-PEG-PEI为载体的干扰组荧光表达均有不同程度减少,与空载体组相比均有统计学差异(P<0.01)。干扰组中EGFP mRNA和蛋白表达与对照组相比均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.01)。干扰质粒与pEGFP-C1质粒共转染PC-3、T24和HEK293细胞后各组荧光表达无统计学差异(P>0.05),EGFP mRNA和蛋白表达水平无差异；以PEI为载体组和转染相同质粒以Tf-PEG-PEI为载体组对比,荧光表达及EGFP mRNA和蛋白表达无统计学差异(P>0.05),但Tf-PEG-PEI为载体组细胞形态较好,存活率较高,转染效率稍高。前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3中均表达NS蛋白；在将干扰质粒pPSMAe/p-shNS-poly(A)转染入LNCaP细胞后NS基因表达水平下调,细胞增大,胞膜边缘突起增多,更趋向于分化；S期细胞的百分率降低,G1期的百分率升高；细胞的体外增殖速率明显降低。在PC-3细胞中NS基因表达无明显下调,细胞周期和增殖能力无明显变化。结论Tf-PEG-PEI具有高效靶向基因转移的能力,可将体外的基因片段高效转入体外培养细胞中,且经PEG修饰后细胞毒性大大降低,是一个安全、高效、的RNA干扰输送系统。PSMAe/p能在高表达PSMA的LNCaP细胞中特异性驱动shRNA转录,而在不表达PSMA的PC-3细胞、T24细胞和HEK293细胞中未能有效驱动shRNA转录；PSMAe/p驱动shRNA靶向干扰NS基因具有细胞特异性,使用细胞特异性启动子是实现前列腺癌靶向基因治疗的有效策略；NS基因可能是前列腺癌LNCaP细胞周期中G1/S检查点一个重要的调节因子,在LNCaP细胞恶性增殖中发挥重要作用,NS可能是前列腺癌基因治疗的理想靶基因之一。