血吸虫Sj14FABP和Sj26GST双价膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26-Sj14的构建和表达

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目的:构建日本血吸虫Sj14FABP和Sj26GST膜锚定共表达质粒pIRES-Sj26-Sj14,并检测其在体外的表达。方法:利用RT-PCR法,以日本血吸虫成虫总RNA为模板,扩增获得Sj14FABP与Sj26GST的全长基因。并先将其克隆到真核表达质粒pVAC中,分别获得重组质粒pVAC-Sj14、pVAC-Sj26。然后分别以pVAC-Sj14、pVAC-Sj26质粒为模板,采用PCR技术扩增出含人白介素2(IL-2 )23个氨基酸的信号肽与人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)COOH-末端32个氨基酸的膜锚定序列在内的Sj14、Sj26修饰基因。并将该两个修饰基因共同构建到真核表达载体pIRES上获得共表达质粒pIRES-Sj26-Sj14,将重组质粒转染Hela细胞,通过RT-PCR的方法及间接免疫荧光技术检测Sj26, Sj14基因的膜锚定表达。结果:经过酶切鉴定、PCR、测序证实所克隆的Sj14FABP、Sj26GST基因与报道结果完全一致,重组真核表达质粒pVAC-Sj14、pVAC-Sj26、pIRES-Sj26-Sj14构建成功。并且pIRES-Sj26-Sj14质粒在体外转染Hela细胞后可表达膜锚定蛋白Sj14与Sj26。结论:成功构建了日本血吸虫Sj14FABP和Sj26GST膜锚定双表达质粒,该质粒转染人子宫颈癌Hela细胞后可正常表达这两种蛋白,为下步对其免疫原性﹑免疫反应性及免疫保护作用的进一步的研究奠定了基础,也给血吸虫疫苗的研究拓宽了思路。
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