9株鱼源鰤诺卡氏菌生物学特性及其致病性分析

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鰤诺卡氏菌是一种革兰氏阳性好氧菌,易引起鱼类尤其鲈形目发生“结节病”,近年来,鰤诺卡氏菌对广东省杂交鳢、大口黑鲈等鱼类危害越来越大,给水产养殖业带来较大经济损失。目前,鱼源鰤诺卡氏菌的研究方向主要集中在细菌分离鉴定、快速检测、组织病理和疫苗研制等,对鰤诺卡氏菌的流行特征以及致病机制等研究仍处于起步阶段。本研究通过开展不同来源鰤诺卡氏菌的生理生化特征、基因型及毒力因子和耐药性的比较以及鰤诺卡氏菌对不同鱼的致病性分析和感染后不同组织的载菌量变化等研究,了解不同来源菌株的相似性以及鰤诺卡氏菌的致病性、组织嗜性,为进一步制定鰤诺卡氏菌病的相应防控与治疗措施提供可靠的科学依据。比较9株菌的生物学特性和致病性,结果显示9株菌与鰤诺卡氏菌的基本理化特征相符;16S rRNA聚类分析均聚为一类,限制性片段长度多样性酶切图谱相同为同一菌种,看家基因secA1分析显示种内相似度高,生长特性无明显差异;受试菌株对大口黑鲈致病性无显著差异,但毒力基因携带情况略有不同,9株菌均携带mce1A、mig和pup基因,而dop和WhiB3只在部分菌株检出;9株菌均对氟甲喹和氨苄西林耐药,除NS1外,都对磺胺间甲氧嘧啶耐药,对大部分抗菌药物敏感,主要携带bla-TEM和sul1耐药基因;9株菌同源性、生物学特性相似,提示华南地区流行的鰤诺卡氏菌可能为同一流行株型。通过鰤诺卡氏菌对不同品种鱼类进行人工感染,结果显示大口黑鲈和杂交鳢感染后死亡率均达85%以上,同时死亡鱼内脏均出现明显白色结节,组织病理学观察肝、肾、脾呈现严重病理损伤,且有肉芽肿结构形成;罗非鱼与草鱼则不易感,死亡率也很低,死亡鱼内脏也未出现明显的症状,且组织病理学观察未发现明显的病理变化。定量检测鰤诺卡氏菌感染后不同时间杂交鳢和大口黑鲈体内各组织器官的载菌量,结果显示鰤诺卡氏菌在杂交鳢肾组织的平均定殖量最高,最高可达1.48×109copies/g,1-7 d所有组织载菌量随着感染时间变化而增加,7d后细菌数量不再有明显变化;大口黑鲈肾组织定殖量最高可达1.0×1010 copies/g,随着感染时间变化,血液载菌量无明显变化,肝、心、肾和脾在1-3 d有短暂下降,3-7 d呈现上升趋势,7 d后细菌含量不再明显变化。结果表明,杂交鳢和大口黑鲈是鰤诺卡氏菌的易感动物,病原菌可通过血液循环到达心、肝、脾、肾等组织进行定殖。综上所有结果显示,华南地区流行的鰤诺卡氏菌同源性高,生物学特性和致病性相近,杂交鳢和大口黑鲈是主要的易感动物,可引起全身性感染且致死率高,该结果为进一步开展鰤诺卡氏菌病的预警和防控技术研究提供参考依据。
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