青岛文昌鱼GpHR基因的表达、鉴定及定位

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糖蛋白激素受体(glycoprotein hormone receptors, GpHRs)属于G蛋白偶联受体家族(GPCRs)的亚家族。在哺乳动物中,GpHRs主要参与两个主要的内分泌途径:下丘脑-垂体-性腺(H-P-G)和下丘脑-垂体-甲状腺(H-P-T)调控轴,主要调控性腺和甲状腺的发育和功能。文昌鱼属于脊索动物门头索亚门,处在无脊椎动物向脊椎动物进化的关键位置,是研究脊索动物演化和胚胎发育的模式动物。利用分子生物学方法研究文昌鱼的GpHR基因,可以在分子层面上阐释脊椎动物GpHR基因的起源与进化。有助于了解该基因的原始功能以及脊椎动物同源基因的起源与进化。本文对文昌鱼GpHR基因的进化、表达及定位方面进行了研究。本实验室利用RT-PCR和RACE技术已得到了文昌鱼GpHR基因的cDNA序列。它的最大开放阅读框为1377 bp,编码一个由459个氨基酸组成的多肽链,其分子量大约为50 kDa。在所构建的进化树中,文昌鱼的糖蛋白激素受体处于基部,说明文昌鱼GpHR还处于比较原始的状态,可能是GpHR进化的一个前体;构建原核和真核表达载体,表达文昌鱼GpHR蛋白,获得了分子量约为50kDa的蛋白;分别使用兔抗TSHR、FSHR、LHR/CGR的抗体进行Western blot检测,结果表明该融合蛋白与三种抗体均有阳性反应,说明该编码蛋白可能是一类糖蛋白激素受体;免疫组织化学分析,兔抗TSHR抗体的免疫反应主要在内柱,卵巢,精巢组织中。另外,兔抗LHR抗体,兔抗FSHR抗体的免疫反应主要在卵巢中;切片原位杂交结果表明,文昌鱼GpHR主要在内柱、卵巢、精巢表达,这与兔抗TSHR抗体的免疫组织化学的结果一致。以上结果说明在文昌鱼体内可能存在两种糖蛋白激素受体,分别进化为TSHR, LHR、FSHR。另外,甲状腺外表达的GpHR,可能与性腺发育有关。
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