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目的:扁平苔藓(OLP)是一种可以累及皮肤和黏膜的慢性炎症性疾病,其病因不明。扁平苔藓也可以单独发生在口腔黏膜。它具有对于皮肤或(和)黏膜的抗原改变而发生细胞免疫反应的特性。hMSH2是人DNA错配修复(hMMR)基因的一种,它在减少基因突变和维持基因组的稳定性方面起到重要的作用。hMSH2在口腔鳞状细胞癌中的改变已被报道,并且有证据显示口腔鳞状细胞癌和口腔扁平苔藓有相关性。在本研究中,采用免疫组化的方法检测51例口腔扁平苔藓中hMSH2蛋白的表达。
方法:选取存档的51例口腔扁平苔藓和40例正常口腔黏膜组织蜡块,分为试验组(OLP组)和对照组(NM组)。将每个蜡块切为4.5μm的切片,共切3张,1张皿染色,1张作为阴性对照,其余1张行hMSH2染色。方法如下:石蜡切片常规脱蜡至水;5%H<,2>O<,2>甲醇振洗25分钟,以封闭内源性过氧化物酶活性;微波抗原修复,92-98℃×15分钟,室温冷却;正常山羊血清封闭,37℃孵育30分钟;倾去血清,滴加一抗,4℃过夜;滴加生物素化二抗,37℃孵育25分钟;滴加辣根酶标记的链酶卵白素,37℃孵育20分钟;最后DAB显色,苏木素复染,脱水、透明、封片。除血清封闭步骤外,以上各步后均以PBS振洗5分钟×3次。用已知hMSH2阳性的口腔鳞状细胞癌(OSCC)标本作为阳性对照;以PBS代替—抗作为阴性对照。以细胞核或浆内出现棕黄色颗粒者为阳性,结果评定参照Lorenzolo muzio标准,每张切片在光镜下随机选取5个高倍视野,每个视野计数100个细胞,观察阳性细胞数,<5%为阴性(-),>5%为阳性(+)。
结果:
1.在正常口腔粘膜组织中,hMSH2阳性染色主要位于胞核内,呈棕黄色颗粒,主要表达于基底层和棘层,部分病例中同时出现胞浆着色,呈现为核浆型。在OLP组织中,hMSH2的阳性染色主要位于细胞的胞核内,少部分也可见到胞浆内有表达,呈黄色颗粒染色。hMSH2在OLP组织中的表达率为52.94%,对照组的表达率为80%,与对照组相比,试验组的阳性率明显减低,二者的阳性表达率之间有显著性差异。
2.在OLP组织中hMSH2的表达与患者的性别、年龄以及OLP的类型无明显的相关性。
结论:
1.在正常口腔粘膜组织和OLP中,均有hMSH2的表达.但在OLP中hMSH2蛋白的表达明显降低,表明hMSH2在OLP的发生发展中发挥一定的作用。OLP可能有潜在的恶变能力。
2.在OLP组织中,hMSH2的表达减少与患者的年龄、性别及OLP的类型无关。