【摘 要】
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前言 以肺纤维化为结局的间质性肺疾病(ILD)病因不明、发病机制复杂且无特效治疗,为国际呼吸学界的研究热点之一。无论病因如何,ILD从肺泡炎的始动到肺纤维化的形成,成纤
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前言 以肺纤维化为结局的间质性肺疾病(ILD)病因不明、发病机制复杂且无特效治疗,为国际呼吸学界的研究热点之一。无论病因如何,ILD从肺泡炎的始动到肺纤维化的形成,成纤维细胞的功能活化是导致纤维化形成的“共同途径”。因此,深入围绕着成纤维细胞的代谢和功能及其调控可能成为从根本上干预肺纤维化进展的重要环节。胰岛素样生长因子(IGF-1)是重要的生长因子,由于在结构上与胰岛素相似,因此对细胞能量代谢,特别是糖代谢可能发挥重要调节作用。因此,本实验通过对IGF-1以及与胰岛素共同调控人肺成纤维细胞糖代谢及功能的研究,为通过调控成纤维细胞糖代谢进而阻止器官纤维化的发生发展提供实验依据。 实验材料与方法 一、实验材料 1.正常人胚肺成纤维细胞(LF)株由中国医大病原生物教研室提供2.5′-FITC荧光标记标记探针(大连宝生物公司提供)、IGF-1(SIG-MA公司)、兔抗人弹性蛋白/胶原蛋白抗体(由武汉博士德公司)、羊抗人HK-2/GLUT-4抗体(ADI公司)、RT-PCR一步法试剂盒(Promega公司)、Trizol(Amersco提供)。 二.实验方法 1.分组干预 选择长成良好单层的二倍体人胚肺成纤维细胞,分别给与空白对照、100ng/ml IGF-1、200ng/ml IGF-1、100ng/ml IGF-1+100ng/ml Insulin、100ng/ml IGF-1+200ng/ml Insulin、100ng/ml Insulin、200ng/ml Insulin共7组每组5瓶细胞。 2.标本采集与测定 刺激24h,收集细胞培养液真空法冻干,Western blotting检测弹性蛋白
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