产油微藻是生产生物柴油的重要原料,为了提高微藻细胞的含油量,需要对微藻的油脂积累和代谢途径进行探索。油体是细胞内油脂储存和代谢的重要细胞器,对它进行深入研究对提高细胞内油脂积累等具有重要意义。本课题以布朗葡萄藻、亚心形扁藻为研究对象,分别探索了基于尼罗红染色的油脂含量测定方法和油体积累方法。随后,对油体的分离方法进行探索。最后对分离的油体进行粒径大小、油脂成分、蛋白组成等方面的表征。通过探索染色前处理和染色条件,优化了葡萄藻的染色方法:藻液摇匀后超声波处理3 min,离心去除培养基,用体积分数8%的DMSO水溶液重悬细胞,调整悬液OD750到0.16,每1 mL样品加入10μL 120μg/mL左右的尼罗红溶液,40℃水浴10 min,激发光波长520 nm。随后用相同的方法探索了亚心形扁藻的油脂测定条件,并确定关键参数为:DMSO体积分数4%、尼罗红浓度大于0.7μg/mL、细胞浓度OD750=0.3。通过探索,本课题建立了针对上述两种微藻细胞的油脂测定方法,实现了准确、快速地对这两种微藻进行油脂含量的测定。通过改进培养装置、筛选培养基等方法提高了两种微藻的生物量,并通过高强度光照提高了细胞内油脂含量,为油体分离实验提供了足够的原材料。随后,分别对两种微藻细胞内油体的分离方法进行探索,通过探索细胞破碎条件、破碎液除杂条件、蔗糖梯度离心条件、纯化条件等,成功从两种微藻中分离到完整的油体。随后对油体进行了初步表征,结果表明:(1)布朗葡萄藻中油体粒径约为1.1μm,亚心形扁藻油体粒径约为0.6μm;(2)两种藻细胞油体中的油脂都以甘油三酯为主,布朗葡萄藻油体中可能还有甘油二酯和固醇酯;(3)两种微藻油体中没有鉴定出与高等植物有同源性的油体特异性蛋白。在课题最后,通过双向电泳技术基本实现了对油体蛋白的进一步分离,这为后序微藻油体上新蛋白的鉴定奠定了基础。