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目的:通过检测缺氧损伤后肾小球系膜细胞中Prohibitin1(PHB1)、Prohibitin2(PHB2)的表达水平,探讨PHB1、PHB2在肾小球系膜细胞缺氧损伤中的作用。 方法:将体外培养的肾小球系膜细胞随机分为两组:正常组和模型组。正常组在常规条件下培养,不做任何干预处理,模型组置于缺氧小室中,充缺氧气体(950mL·L-1N2和50mL·L-1CO2)密封24h、48h建立肾小球系膜细胞缺氧损伤模型。于缺氧24h、48h后,收集细胞进行相关指标检测。倒置光学显微镜观察细胞形态,试剂盒检测细胞活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)含量和线粒体膜电位变化情况,细胞计数CCK-8试剂盒(CellCounting Kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction,Real-time-PCR)检测细胞PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(Transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的mRNA表达水平,Western blot法检测细胞PHB1、PHB2、TGF-β1、α-SMA、Ⅳ型胶原(collagen-Ⅳ,Col-Ⅳ)蛋白和纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)的蛋白表达水平。 结果:1.光镜下正常组系膜细胞呈长梭型,胞体舒展饱满,排列有序,细胞间隙适中,模型组细胞呈狭长型,胞体细长,形态萎缩,细胞间隙增宽加深,细胞碎片增多,缺氧48h组细胞形态改变较缺氧24h组改变更加明显。 2.与正常组相比,模型组系膜细胞的PHB1和PHB2的mRNA及其蛋白表达均显著下降(均P＜0.05);与缺氧24h组相比,缺氧48h组细胞的PHB1和PHB2的mRNA及其蛋白表达均显著下降(均P＜0.05)。 3.与正常组相比,模型组系膜细胞的ROS显著升高(P＜0.05),线粒体膜电位显著下降(P＜0.05);与缺氧24h组相比,缺氧48h组细胞的ROS显著升高(P＜0.05),线粒体膜电位显著下降(P＜0.05)。 4.与正常组相比,模型组系膜细胞的TGF-β1的mRNA及其蛋白表达、α-SMA的mRNA及其蛋白表达、以及Col-Ⅳ和FN蛋白表达均显著升高(均P＜0.05);与缺氧24h组相比,缺氧48h组细胞TGF-β1的mRNA及其蛋白、α-SMA的mRNA及其蛋白表达、以及Col-Ⅳ和FN蛋白表达均显著升高(均P＜0.05)。 5.与正常组相比,模型组系膜细胞的凋亡率显著升高(P＜0.05),细胞活力显著下降(P＜0.05);与缺氧24h组相比,缺氧48h组细胞的凋亡率显著升高(P＜0.05),细胞活力显著下降(P＜0.05)。 6.相关性分析:模型组系膜细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达与TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达及ROS含量、细胞凋亡率均呈显著负相关(均P＜0.05),与线粒体膜电位、细胞活力均呈显著正相关(均P＜0.05)。 结论:在系膜细胞缺氧模型中,PHB1和PHB2表达显著降低参与了细胞缺氧损伤过程,缺氧时间越长,PHB1和PHB2表达降低越明显,细胞损伤越重。其机制可能与PHB1和PHB2表达降低使ROS升高,线粒体膜电位降低,上调TGF-β1和α-SMA表达从而导致ECM积聚有关。