TCDCA抗炎免疫调节作用机制的转录组学研究

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牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)作为胆汁酸的主要活性成分之一,不仅对急、慢性炎症均有抑制作用,而且还能调节机体的免疫功能。为了深入揭示TCDCA的抗炎免疫调节作用,本研究开展了下列主要内容的研究:(1)采用实时荧光定量PCR检测了TCDCA作用于AA模型大鼠成纤维滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)的时效关系曲线;(2)采用转录组测序(RNA-seq)技术对TCDCA作用于AA模型大鼠FLS细胞进行了转录组测序;(3)采用实时荧光定量PCR技术验证差异表达基因GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF及CSTB的表达;(4)采用免疫荧光术检测NR8383细胞内糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的表达及不同浓度TCDCA对NR8383细胞核移位的影响;(5)采用实时荧光定量PCR法检测了TCDCA对AA模型大鼠FLS细胞中VCAM-1和COX-2基因的表达;(6)采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了TCDCA对AA大鼠FLS细胞中VCAM-1蛋白的表达。结果表明:TCDCA作用于FLS细胞最佳作用时间为12 h;应用RNA-seq技术对4个实验组的12个样本进行测序后筛选出24个差异基因;从初筛的差异基因中,挑选出与抗炎免疫相关的差异基因共5个,分别为GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF、CSTB;TCDCA可以上调SRSF9、GPX3、CSTB mRNA的表达量。结果还证明1×10-5mol/L浓度的TCDCA可显著的(p<0.05)上调CTGF mRNA的表达量;10-5、10-7mol/L的TCDCA可极显著的(p<0.01)上调GAPDH mRNA的表达量;TCDCA可以极显著性(p<0.01)的激活NR8383细胞内的GR受体,且在加入GR的特异性抑制剂RU486之后,GR受体的荧光值显著下降;而TCDCA组和DEX组间无显著性差异(p>0.05);TCDCA可以抑制VCAM-1及COX-2的表达量。本试验研究的主要结论:(1)TCDCA促进FLS中TGR5及GR受体表达的最佳时间为12h;(2)TCDCA作用于FLS后,经RNA-seq测序共筛选出24个差异表达基因,其中与抗炎免疫相关的差异基因为GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF及CSTB;(3)经实时荧光定量PCR法验证,GPX3、SRSF9与转录组测序结果相一致;CTGF、GAPDH与转录组测序结果则不相一致;CSTB与转录组测序结果虽不相一致,但与文献报道一致;(4)TCDCA能够上调AA模型大鼠FLS中GPX3、SRSF9及CSTB的表达量;(5)TCDCA能够使NR8383内的GR受体发生核移位,显著抑制VCAM-1、COX-2的表达量。综上所述,TCDCA抗炎免疫调节作用与其上调GPX3、SRSF9和CSTB的表达量以及激活糖皮质激素受体,继而抑制VCAM-1、COX-2的表达量有关。
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