世界卫生组织公布数据显示，世界每年新增肝癌患者超过100万人，死亡人数达61万人。中国每年新增肝癌人数34万人，肝癌死亡人数11万，是全球肝癌发病率和死亡率最高的国家。目前手术切除对早期肝癌患者的治疗效果显著，但由于肝癌多数被诊断时就已进入中晚期，并常伴有肝硬化等肝功能异常，所以手术切除受到很大限制。此外放疗、化疗对癌细胞的增殖有一定抑制作用，但不容忽视的是，放疗、化疗在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常组织细胞也有损伤，其后期疗效往往不能令人满意。随着科技的进步，抗癌药物的研发不仅仅局限于化学药物，靶向的生物治疗药物也逐步引起了人们的广泛关注，例如索拉菲尼，它是一种以肿瘤细胞信号传导为靶向的生物抗肝癌药物，已通过了美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration of US，USFDA）的认证并成功上市。因此，以干预肝癌细胞信号传导、诱导肝癌细胞凋亡的生物治疗药物的研发将极大改善抗肝癌药物严重缺乏的现状。本研究室在前期工作中通过旋毛虫cDNA噬菌体展示文库，利用人肝癌细胞系H7402和人白血病细胞系K562进行细胞淘选，获得了来自旋毛虫的抗肿瘤基因A200711，将该基因转染于人肝癌细胞H7402可以明显抑制细胞增殖，促进凋亡相关基因Caspase-3和Caspase-9的表达。基于旋毛虫A200711基因真核表达产物可诱导肿瘤细胞凋亡，为进一步验证其抗肿瘤特性，本研究对该基因进行原核表达纯化，验证该蛋白在体内及体外的抗肿瘤作用，为进一步研制基于旋毛虫的抗肿瘤生物制剂奠定基础。本实验以旋毛虫cDNA文库为模版，针对旋毛虫A200711基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增目的片段并克隆至表达载体pET28a，将成功构建的重组表达质粒pET28a-A200711转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达，经Ni亲和层析柱纯化并柱上复性后得到重组蛋白，SDS-PAGE检测蛋白的表达情况。Western blotting结果显示重组蛋白在21kDa处出现，并可被猪感染旋毛虫26天的猪血清所识别，表明旋毛虫A200711蛋白在重组菌中成功得到表达。我们将纯化、复性后的旋毛虫A200711蛋白透析及浓缩，喹啉酸（Bicinchoninic acid，BCA）法测定蛋白浓度后，进行旋毛虫A200711对H7402人肝癌细胞系的体内、体外实验，验证旋毛虫A200711的抗肿瘤作用。不同浓度旋毛虫A200711蛋白分别作用人肝癌细胞系H7402和人正常肝细胞系H7702，CCK-8检测结果显示，旋毛虫A200711蛋白有效抑制了人肝癌细胞系H7402的增殖，并存在“量效-时效”关系，对人正常肝细胞系H7702的增殖不存在具有统计学意义的影响。Annexin V-FITC法检测旋毛虫A200711蛋白对H7402细胞凋亡的影响，流式细胞仪检测结果显示增加蛋白剂量会增强其促凋亡的作用，且具有线性关系。细胞周期检测发现旋毛虫A200711蛋白作用H7402肝癌细胞后会使细胞周期发生改变，细胞周期被阻滞于S期，蛋白浓度较高时出现明显的sub-G1凋亡峰。我们通过建立人肝癌细胞系H7402裸鼠皮下种植瘤模型，在体内检测了旋毛虫A200711蛋白对H7402肝癌细胞生长情况的影响。以PBS为阴性对照，抗肿瘤常用药物顺铂（DDP）为阳性对照，我们对实验动物进行为期21天的瘤内注射蛋白的治疗。结果表明旋毛虫A200711蛋白可以抑制肝癌细胞系H7402裸鼠皮下种植瘤的生长，和DDP相比，蛋白作用组对裸鼠的生理状况影响较小。本研究表明旋毛虫A200711蛋白在体内、体外均可抑制H7402细胞的增殖，诱导肿瘤细胞的凋亡，且对人正常肝细胞系H7702的生长无影响；与抗肿瘤常用药物顺铂相比，旋毛虫A200711蛋白具有副作用小、药效温和的特点，这为旋毛虫A200711蛋白成为抗肿瘤候选药物提供了一定的研究基础。