基于NF-κB相关炎性信号通路探讨芪连扶正胶囊抑制肺癌增殖与转移的机制研究

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目的:研究肿瘤炎性微环境下芪连扶正胶囊调控NF-κB相关炎性信号通路抑制肺癌增殖转移的机制,并探讨构建以癌毒理论为中心的肺癌诊治思路及体系。方法:根据前期研究基础进行芪连扶正胶囊含药血清溶液的配制;体外培养人肺癌A549细胞,建立A549细胞与巨噬细胞的共培养体系;观察炎性环境对A549细胞形态的影响及芪连扶正胶囊含药血清的干预作用;通过划痕实验观察芪连扶正胶囊含药血清对共培养条件下A549细胞迁移能力的影响;通过Transwell小室侵袭实验观察芪连扶正胶囊含药血清对共培养条件下A549细胞侵袭能力的影响;通过ELISA法检测芪连扶正胶囊含药血清对共培养上清液TNF-α、IL-6浓度的影响;Real-Time PCR法观察芪连扶正胶囊含药血清对共培养条件下A549细胞NF-κB通路相关基因和EMT相关基因mRNA表达量的影响;通过Western blot观察芪连扶正胶囊含药血清对共培养条件下A549细胞NF-κB通路相关蛋白和上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达量的影响。结果:炎性共培养条件下,肺癌A549细胞呈类纤维细胞样,加入芪连扶正胶囊含药血清后又恢复至上皮样;MTT实验、划痕实验、Transwell侵袭实验表明,芪连扶正胶囊含药血清可抑制共培养条件下A549细胞的增殖、迁移和侵袭;芪连扶正胶囊含药血清可下调共培养上清液TNF-α、IL-6浓度的水平;Real-Time PCR实验表明,芪连扶正胶囊含药血清可下调共培养条件下A549细胞CHUK、IKBKB、CDH2、Rel A、VIM、SANIL1 mRNA的表达量,上调CDH1、SNAIL2表达量,提示芪连扶正胶囊含药血清可干预NF-κB及EMT蛋白相关基因的表达;Western blot实验表明,芪连扶正胶囊含药血清可下调共培养条件下A549细胞中NF-κB、IKKα、N-cad、VIM、Snail的蛋白表达量,上调IKKβ、E-cad蛋白表达量,提示芪连扶正胶囊可能通过NF-κB通路抑制EMT的发生,进而抑制A549细胞的侵袭转移。结论:芪连扶正胶囊可以抑制共培养条件下A549细胞的增殖、迁移、侵袭和转移,其机制可能与下调炎症因子的水平,进而抑制NF-κB信号通路的激活和上皮间质转化的形成有关。
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