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目的：①构建携带人过氧化物酶体增殖物激活受体γ1基因的重组腺病毒载体(Ad-PPARγ1)、携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒载体(Ad-EGFP);②研究冠脉途径转染腺病毒载体到大鼠心肌的可行性,如果可行观察PPARγ1基因转染对缺血再灌注心肌是否有保护作用；③研究心肌缺血再灌注以后PPARγ1表达的改变以及PPARγ1基因保护缺血再灌注心肌的机制。方法：实验分三部分：①设计引物,利用PCR方法从含有目的基因的质粒或者cDNA文库中钓取目的基因,将目的基因和pDC315质粒载体分别酶切。酶切产物经电泳回收后进行定向连接或者交换,其产物转化细菌感受态细胞。对阳性克隆进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和对比分析,比对正确的即为构建成功的目的质粒。构建成功后行腺病毒包装、扩增、纯化、滴度测定。②通过预实验确认经冠脉转染的可行性。正式实验SD大鼠随机分为4组：Sham组转染Ad-EGFP 3天后,开胸后冠脉左前降支只过线不结扎；IR组转染Ad-EGFP3天后,心肌缺血30min,再灌注120min；IPC组转染Ad-EGFP 3天后,5min缺血,5min再灌注,重复3次后行心肌缺血30min,再灌注120min；PPARγ1组转染Ad-PPARγ1 3天后,行心肌缺血30min,再灌注120min。记录缺血再灌注前后不同时间点心功能指标,检测心律失常发生率并作出评分,测定肌钙蛋白I含量,伊文氏蓝灌注和TTC染色测定危险区面积和心梗面积,光镜和电镜观察心肌组织形态学超微结构变化,TUNEL法测凋亡。③在第二部分的基础上,用Western Blot测定蛋白含量,PT-PCR测定mRNA含量,研究心肌缺血再灌注后以及转染后PPARγ1表达的变化,PPARγ1通路保护心肌作用中是否有Bcl-2、Bax发挥作用,以及激活PPARγ1通路是否能够通过调控选择素表达保护心肌。结果：①成功构建Ad-EGFP和Ad-PPARγ1。②预实验确定经冠脉途径能够转染心肌,且最佳病毒载体滴度为109pfu/ml。再灌注末,与Sham组相比,IR组多数心功能指标明显恶化,而IPC组和PPARγ1组多数心功能指标优于IR组,且心梗面积较小,凋亡指数较低,心肌组织形态学观察也优于IR组。③心肌缺血再灌注后PPARγ1表达下降,IPC和转染PPARγ1基因后表达上调；激活PPARγ1通路能够上调Bcl-2/Bax比率减少凋亡,能抑制选择素E、P表达上调而抑制炎症细胞聚积。结论：本课题成功构建了Ad-PPARγ1和Ad-EGFP,再灌注以后心肌表达PPARγ1下降,转染后PPARγ1表达增加,通过冠脉途径转染人PPARγ1基因能够保护缺血再灌注心肌,激活PPARγ1通路能够通过上调Bcl-2/Bax比率抑制凋亡,下调选择素E、P抑制炎症细胞浸润。