论文部分内容阅读
目的:采用酶联免疫吸附法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay ELISA）、CCK-8法、扫描电镜（scanning electron microscope SEM）等实验方法,分析对比应用喷砂、Er:YAG激光、碳纤维刮治器处理对氧化锆表面形态的改变和人牙龈成纤维细胞（human gingval fibroblasts HGFs）在其表面的初期黏附、增殖情况及细胞生长状态;同时分析对比应用Nd:YAG激光照射经牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis LPS）刺激的HGFs和未经激光或LPS处理过的HGFs在处理过的氧化锆表面初期黏附、增殖情况、细胞生长状态及分泌白细胞介素-6（Interleukin-6IL-6）和白细胞介素-8（Interleukin-8 IL-8）的情况,初步探讨Er:YAG激光清创对HGFs黏附、生长以及Nd:YAG激光对HGFs的增殖抗炎的影响,为双波长激光辅助治疗种植体周黏膜炎提供理论依据以及实验数据。方法:实验1:应用喷砂、Er:YAG激光、碳纤维刮治器处理对氧化锆表面,以未经处理组作为对照组。用扫描电子显微镜（SEM）观察各样本表面形貌;收集健康口腔牙龈组织并体外培养HGFs,用倒置相差显微镜观察并记录HGFs细胞形态、生长状况,对所培养细胞的来源进行免疫组化染色鉴定。将HGFs与各组样本复合培养,分别用扫描电镜（SEM）观察24h HGFs黏附情况,CCK-8法测定1、3、5、7d HGFs增殖情况。实验2:应用Nd:YAG激光照射经P.g LPS刺激的HGFs,以无激光及P.g LPS组作为对照,将HGFs接种至优选出的氧化锆表面,A、B组用正常培养基,C、D组用含P.g LPS培养基培养24h,Nd:YAG激光照射B、C组细胞。用扫描电镜（SEM）观察不同处理方式的细胞在氧化锆表面附着情况;CCK-8法检测各组细胞培养物的细胞在1、3、5、7d增殖情况,并在24h ELISA检测IL-6和IL-8的分泌情况。结果:实验1:1.扫描电镜（SEM）观察各组氧化锆表面形态A组未处理组:表面可见浅凹槽和浅凹坑,但与B、C、D组相比,表面相对光滑。B组喷砂组:除浅凹槽外可见较深的凹坑,边缘锐利的突起,氧化锆表面相对A组较粗糙。C组Er:YAG组:可见前凹槽与浅凹坑,以及突起的高密度颗粒,与A组表面相似,但较A组粗糙。D组碳纤维组:表面可见明显的碳纤维划痕和较为粗大高密度颗粒残留。2.扫描电镜（SEM）观察HGFs在各组氧化锆表面24h细胞黏附情况A、B、C组细胞呈梭形、扁平星形附着于各组氧化锆表面,从细胞附着密度、伸出伪足伸出数量、细胞外基质分泌等情况A、B、C组未见明显差异;D组细胞形态大致呈梭形,部分细胞胞体瘦小,细胞外基质分泌情况不如A、B、C组。3.HGFs在不同处理方式氧化锆表面的增殖情况体外培养的HGFs表现为典型的成纤维细胞形态,免疫细胞化学染色显示细胞抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性。培养1、3d后,A、B、C、D组间两两比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,培养5、7d,D组与A、B、C三组差异有统计学意义（P＜0.05）,D组OD值小于A、B、C组。培养5、7d,A、B、C三组之间两两比较差异无统计学意义（P＞0.05）实验2:1.扫描电镜（SEM）观察各组HGFs在氧化锆表面24h黏附形态A组:HGFs组:细胞呈长梭形,胞体饱满,伸出的伪足较少。B组:Nd:YAG激光+HGFs组:细胞呈角形,细胞间相互连接,伸出较多的细长伪足,牢固附着于材料表面。C组:Nd:YAG激光+P.g LPS+HGFs组:细胞类似梭形,伸出伪足较少。D组:P.g LPS+HGFs组:细胞失去正常长梭形形态,扁平呈类圆形。2.各组HGFs在氧化锆表面增殖情况培养1、3、5d,A、B组间比较,C、D组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）,培养7d,A、B组间比较,C、D组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。培养1、3、5、7d,A、D组间比较,B、C组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。3.各组HGFs 24h在氧化锆表面分泌IL-6、IL-8情况1)IL-6分泌情况:A、C、D组之间两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）,IL-6分泌量A组＜C组＜D组;B、C、D组之间两两比较,IL-6分泌量B组＜C组＜D组;A、B组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）2)IL-8分泌情况:A、C、D组之间两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）,IL-8分泌量A组＜C组＜D组;B、C、D组之间两两比较,IL-8分泌量B组＜C组＜D组;A、B组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）结论:1.相比碳纤维刮治器,Er:YAG激光和喷砂更能够对氧化锆表面进行安全有效清创。2.P.g LPS对HGFs有炎性诱导作用,可用于建立种植体周黏膜炎体外模型。3.Er:YAG激光安全有效清创氧化锆表面,同时Nd:YAG激光能够抗炎和促进软组织愈合,双波长激光治疗种植体周黏膜炎具有一定优势。