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鲜切花是花卉产业化生产的重要产品类型之一,是花卉市场的主导产品。但鲜切花采摘后离开母体,很快就会枯萎,失去鲜活的色泽,使其观赏品质大大受到影响。而乙烯是许多鲜切花最主要的致衰因子,内源或外源乙烯通过信号转导引起切花衰老反应。本研究利用从月季和矮牵牛花瓣中克隆到的乙烯信号传导相关基因RTE1,对模式植物矮牵牛进行遗传转化。研究其在乙烯信号转导途径中的作用,进而为利用基因工程技术减少花瓣乙烯敏感性,抑制花瓣乙烯致衰,提高切花采后质量进行初步探索。主要结果如下:
(1)成功构建了植物表达载体pMOG-RRTE1-a以及表达载体pMOG-PRTE1-s和pMOG-PRTE1-a,
(2)矮牵牛快繁体系的建立:最适诱导培养基MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.1mg/L,分化培养基MS+6-BA0.1 mg/L+NAA0.1mg/L,生根培养基1/2MS。
(3)通过抗生素羧苄霉素Carb和潮霉素Hyg的抗性试验,得到矮牵牛的最佳抗生素使用浓度为羧苄霉素Cef500mg/L,潮霉素Hyg5mg/L。
(4)研究了不同预培养时间,农杆菌菌液浓度,浸染时间及共培养时间对矮牵牛无菌苗叶芽分化的影响,得到矮牵牛在本实验中最佳转化条件。矮牵牛的预培养时间,农杆菌菌液浓度,浸染时间,共培养时间以及延迟筛选时间分别3-5 d,OD600为0.5时浸染5min,共培养3d和延迟筛选3~6d。
(5)通过农杆菌介导法将Ph-RTE1导入矮牵牛中,经潮霉素筛选得到抗性植株,经PCR检测得到12株矮牵牛阳性植株。