结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)是目前最常见的恶性肿瘤之一,而且发病年龄日趋年轻化,可能与人们逐渐西方化的饮食及生活方式有关。近年来随着诊断技术和治疗水平的提高,结直肠癌患者的生存期明显延长,但晚期结直肠癌依然是我国癌症相关死亡的主要原因之一。因此如何抑制肿瘤的进展成为亟待解决的难题。人们发现血管生成在肿瘤复发和转移过程中发挥了重要作用,其中CD151-整合素复合体可以将细胞外信号内传,激活细胞内途径,促进血管的增生。近年来Wnt信号通路作为与肿瘤密切相关的信号通路引起人们广泛关注,它可以通过对血管内皮生长因子的调控影响肿瘤血管的生成,但CD151是否能通过Wnt信号通路调节肿瘤的血管生成,目前尚不明确。目的:本实验以人结肠癌细胞(HT29)为参考对照,检测敲除CD151基因的HT29细胞(CD151~--HT29)中β-catenin基因及蛋白的表达变化,并对比观察两种细胞裸鼠移植瘤的生长及血管增生的差异,探讨CD151基因的表达通过结肠癌中Wnt/β-catenin信号通路影响血管增生的机制。方法:1运用细胞培养技术对HT29细胞及CD151~--HT29细胞进行贴壁培养,观察其生长状态,选取对数生长期的HT29细胞及CD151~--HT29细胞,经过CK20检测后用于细胞实验及动物造模。2运用western blotting技术分别检测HT29细胞和CD151~--HT29细胞CD151蛋白的表达情况。3运用Real-Time PCR技术分别检测HT29细胞和CD151~--HT29细胞β-catenin m RNA的表达,探究CD151基因缺失状态对β-catenin基因转录水平的影响。4运用western blotting技术分别检测HT29细胞和CD151~--HT29细胞β-catenin蛋白的表达,探究CD151能否在蛋白水平影响Wnt信号通路的功能。5将实验用裸鼠随机分为2组,分别定义为HT29细胞组和CD151~--HT29细胞组,将细胞接种于裸鼠右侧腋窝皮下,建立移植瘤动物模型,每日观察裸鼠的生存状态及成瘤时间等情况,每三天测量肿瘤体积绘制生长曲线,21天后将荷瘤裸鼠处死,对比观察其成瘤情况和移植瘤血管生成的差异。结果:1 Western blotting技术分别对实验用HT29细胞及CD151~--HT29细胞进行检测,结果显示HT29细胞存在CD151蛋白的表达,而CD151~--HT29细胞CD151蛋白表达缺失。2 Real-Time PCR技术分别对HT29细胞和CD151~--HT29细胞进行检测,结果显示两种细胞中β-catenin m RNA的CT值分别为(14.65±1.23)和(14.05±1.16),说明HT29细胞β-catenin m RNA转录水平明显高于CD151~--HT29细胞,结果差异具有统计学意义(P<0.05)。3 Western blotting技术分别对实验用HT29细胞及CD151~--HT29细胞进行检测,结果显示HT29细胞中β-catenin蛋白的表达量高于CD151~--HT29细胞,其蛋白表达的荧光强度值分别为(0.186±0.009)、(0.168±0.010),两者的表达量差异具有统计学意义(P<0.05)。4移植瘤检测(1)HT29细胞组及CD151~--HT29细胞组瘤重分别为(1.175±0.127)、(1.059±0.142),结果差异有统计学意义(P<0.05),说明CD151~--HT29组肿瘤生长受到抑制。(2)HT29细胞组和CD151~--HT29细胞组移植瘤组织经CD34染色后计算的MVD值如下:HT29细胞组(42.20±5.36)个,CD151~--HT29细胞组(32.80±5.89)个,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1 HT29细胞移植瘤的增殖速度明显高于敲除CD151基因HT29细胞组,推测CD151基因表达的下调有抑制结肠癌肿瘤细胞生长的作用。2敲除CD151基因HT29细胞移植瘤组织中肿瘤血管的生成明显减少,推测CD151基因表达可能参与肿瘤血管生成的调控。3 CD151基因表达的下调同时伴有细胞内β-catenin蛋白水平下降,推测敲除CD151基因可能通过调控Wnt信号通路的功能,抑制肿瘤血管的生成和肿瘤细胞的增殖。