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目的大麻素受体1(CB1R)的拮抗剂可以用于治疗肥胖及代谢综合征等疾病。本实验旨在(1)寻找具有良好的抗肥胖作用、不能透过或较少透过血脑屏障的CB1R拮抗剂。(2)建立Tag-lite反应体系,验证CB1R二聚体的存在,考察已报道CB1R配体对该受体二聚化的影响,并试图建立高效、环保的受体配体结合试验平台。方法(1)寻找新的CB1R拮抗剂方法:利用CB1R信号通路相关实验筛选并验证化合物体外活性,即通过钙流实验筛选对CB1R受体具有拮抗活性的化合物,用放射性配体全细胞结合实验验证化合物为CB1R特异性配体,通过ERK磷酸化实验再次验证化合物的拮抗活性。体内代谢实验考察化合物在体内的分布情况,观察化合物透过血脑屏障的量,最后利用饮食诱导肥胖(DIO)小鼠动物模型来验证化合物对肥胖动物的抗肥胖作用。(2)建立Tag-lite反应体系方法:利用htrf通过Lumi4-Tb(100nM)底物和绿色(红色)荧光底物相互作用,建立CB1R二聚化体系,验证CB1R二聚体的存在。给予已报道CB1R配体(10μM,预处理15分钟)考察其对CB1R二聚化的影响结果(1)经化合物筛选后得到了二苯甲基哌嗪类CB1R反向激动剂Compound13(即SJK-MT-13)的一对手性对映体,SJK-MT-13R与SJK-MT-13S。三者在体外均有很好的CB1R拮抗活性,表现在钙流实验中能够拮抗CP55940引起的钙流,IC50值分别为2.7 nM,0.9 nM及21.5nM;在全细胞结合实验中的Ki值分别为0.15 nM,0.2 nM及1.1 nM;三者均可以拮抗CP55940引起的ERK磷酸化。代谢实验中,SJK-MT-13R的绝对生物利用度以及给药9小时后化合物脑组织/血浆(B/P)分布比值均优于SJK-MT-13S。在DIO小鼠实验中,SJK-MT-13R能够显著降低DIO小鼠体重,SJK-MT-13S无影响。(2)利用htrf技术得到了 SNAP底物Lumi4-Tb和绿色(红色)荧光底物相互作用的钟形曲线,再次验证CB1R二聚体的存在,给予已报道配体对CB1R二聚化没有影响。结论化合物SJK-MT-13的手性对映体SJK-MT-13R和SJK-MT-13S,SJK-MT-13R在体内、体外活性均明显优于SJK-MT-13S,提示SJK-MT-13R为优势异构体,发挥SJK-MT-13的主要药效学作用,可以将其作为治疗肥胖新药研发中的候选化合物。利用htrf成功建立Tag-lite反应体系,验证了 CB1R二聚体的存在。