酿酒酵母DNA损伤修复复合物SHU-Complex的结构与功能研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangyili164958807
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本研究主要包含两方面的内容:酿酒酵母DNA损伤修复复合物SHU-Complex及其亚复合物的蛋白质晶体学研究以及SHU-Complex的小角散射研究与功能实验。DNA损伤修复是生物体维护自身遗传信息稳定性的关键,DNA损伤修复机能的缺陷会导致许多重要的遗传疾病甚至癌症。DNA重组修复是DNA损伤修复机制中的重要一环,其中Rad51蛋白是这个修复通路上的核心蛋白。Rad51家族蛋白正常功能的行使受到一类叫做Rad51 paralog旁系同源家族蛋白的调节,然而目前人们对Rad51 paralog蛋白的了解还很有限。  本文选取酿酒酵母中隶属于Rad51 paralog家族的一个由Psy3,Csm2,Shu1和Shu2四个蛋白组成的蛋白复合物SHU-Complex为研究对象,综合运用多种方法对其开展研究。首先,我们利用分子生物学技术克隆了四个蛋白的基因并研究了四个蛋白在溶液中的相互作用关系,成功纯化了SHU-Complex多个亚复合物和整体复合物的蛋白,并做了结晶实验研究,不但得到了SHU-Complex整体蛋白的晶体,而且最终成功地利用X射线晶体学解析了Psy3-Csm2亚复合物的1.8(A)的高分辨结构,并对其结构进行分析比对,发现它们与Rad51家族蛋白的特征结构域有很大的相似性。运用同步辐射小角散射技术对Shu1-Shu2蛋白以及SHU-Complex的整体溶液构象做了研究,并结合Psy3-Csm2的晶体学结构使我们对这个复合物的结构信息有了更深入的了解。然后我们对SHU-Complex的DNA结合功能和ATP水解活性做了测试,得出了SHU-Complex偏好结合双链DNA的结论并证明了它有依赖于DNA的ATP水解能力。最后,我们综合同步辐射晶体学和小角散射方法,并结合生化实验结论,勾画出了SHU-Complex结合双链DNA的整体模型,并结合已知的资料对其行使功能的具体机理做出了合理性推测。我们的研究对于人类认识Rad51 paralog家族蛋白的结构和功能提供了有力的支持。
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