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肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)是死亡率很高的恶性肿瘤之一。流行病学调查发现,男性HCC发病率通常高于女性,即具有显著的性别差异。提示,雌激素在HCC的发生发展中具有重要作用。雌激素与不同的雌激素受体(Estrogen Receptor, ER)结合可以通过经典的基因组效应,也可以通过快速的非基因组效应参与肝癌的发生和发展。雌激素受体不同亚型的表达量也可以作为肝癌细胞恶性转移的指示因子。肝癌患者死亡的主要原因是肝癌细胞的肝内侵袭及转移,最终导致肝脏功能衰竭。然而肝癌早期大部分癌细胞并无转移能力,只有小部分会发生肝外转移,因此,研究肝癌细胞转移能力的改变及机制具有重要意义。ER-α36是2005年发现的一种新型雌激素受体亚型,不仅可以定位在质膜上介导雌激素的快速调控作用,还可以转位至细胞核中通过招募转录因子调控靶基因转录。实验室前期研究发现,ER-α36在正常肝细胞及不同类型肝癌细胞中表达量均有差异,然而其在肝癌发生发展中的作用机制并不十分清楚。本研究以人类原发性肝癌细胞系SMMC-7721为实验材料,转染ER-a36-shRNA干扰质粒,建立ER-α36敲低的细胞模型(7721/Sh36),采用RT-PCR、Soft agar2Transwell、增殖曲线实验检测ER-α36无雌激素作用时在人肝癌细胞增殖、粘附、侵袭、转移中的作用,通过MTT、Western Blot、荧光素酶报告基因实验等方法研究ER-α36在雌激素作用时的转录活性及其介导激活的信号通路在肝癌细胞中的作用机制,旨在为肝癌临床研究提供一新的靶标。结果如下：1)利用基因干扰技术,建立了ER-α36稳定敲低的人肝癌细胞模型7721/Sh36,观察了雌激素及营养剥夺对细胞存活率的影响,结果发现,与对照组相比,ER-α36基因敲低导致细胞营养剥夺耐受性降低,而低浓度血清补充会使细胞存活率升高。2)ER-α36敲低降低肝癌细胞高浓度雌激素敏感性并介导低浓度雌激素信号通路的激活。ER-α36介导肝癌细胞膜雌激素信号通路的激活,营养剥夺后肝癌细胞死亡率与E2浓度呈线性关系,但敲低ER-κ36后线性相关性消失,进一步研究发现,E2,E2(3-BSA及ER-α36特异性激动剂IC162均可激活ER-a36,ER-a36可介导1nM(低浓度)E2激活MAPK信号通路。3)ER-α36敲低促进肝癌细胞恶性转移。与对照组相比,ER-α36敲低后细胞间密度依赖性接触抑制作用解除,平台期停留时间显著延长,克隆形成能力增强,具体机制可能与增殖相关蛋白PCNA及p-MAPK表达量升高,抗凋亡蛋白p-Akt降低有关；肝癌细胞转移、侵袭及粘附能力显著提高,其机制与MMP-2表达量升高有关。结论：在肝癌细胞中,ER-α36既可作为雌激素受体亚型介导调控肝癌细胞雌激素信号通路,也可作为调控因子影响肝癌细胞恶性程度。