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缺血性心脏病引起的心律失常,尤其是室性心律失常(包括室性早搏、室速和室颤)是导致患者猝死的主要原因之一。研究认为细胞内存在着大量的氧自由基、钙超载以及酸性物质,而室性心律失常是一种多种机制共同作用的过程。通过大量的研究发现,缝隙连接改变和许多病理生理变化有着联系,并且缝隙连接的改变和心律失常有着重要的联系。学者们把和心律失常有关的缝隙连接改变称为缝隙连接重构。缝隙连接是细胞间进行信息通讯以及物质交换的重要途径,对多细胞生命体有着重要的作用。心室肌细胞闰盘内缝隙连接的重要连接蛋白为Connexin 43(Cx43),很多研究者通过实验发现该物质表达与分布的异常与心律失常发生有关。因此,研究心肌缺血时Cx43表达是否异常,对缺血后发生心律失常的作用机制可提供重要的理论依据,为临床上治疗缺血后心律失常起指导作用。第一部分:厄贝沙坦作用后大鼠缺血心肌室性心律失常的发生及缝隙蛋白Cx43表达目的:探讨大鼠心肌缺血时室性心律失常的发生,并检测心肌缝隙连接蛋白Cx 43的表达。探讨大鼠心肌缺血时厄贝沙坦对心肌Cx43表达及室性心律失常发生的作用。方法:1、实验分组:随机选取40只SD大鼠,分为四组,每组10只,对照组(即假手术组:只行开胸术,而不造成心肌梗死)、陈旧性心肌梗死组、厄贝沙坦组、陈旧性心肌梗死+厄贝沙坦组。2、大鼠心肌梗死模型的构建:大鼠麻醉后,给予呼吸机辅助呼吸,在左心耳与肺动脉圆锥之间距主动脉根部3mm处结扎冠脉前降支,术后连续3天肌肉注射青霉素40万单位以预防感染。3、大鼠心梗后室性心律失常的发生次数:每周2小时监测室性心律失常的发生次数,4周末对比各组大鼠室性心律失常的发生。4、大鼠心梗后Cx43表达水平的改变:于4周末通过Western blot和免疫组化方法分别检测正常大鼠心肌与心梗大鼠心肌Cx43蛋白的表达,对比两者含量变化,阐明心肌缺血与Cx43的关系。5、ARB类药物厄贝沙坦(30mg/kg.d)灌胃干预后观察对照组大鼠与处理组大鼠,通过连续心电图监测4周,对比其室性心律失常的发生次数,阐明厄贝沙坦可否降低室性心律失常的发生。6、心肌Cx43的改变:陈旧性心肌梗死+厄贝沙坦组大鼠,给予厄贝沙坦灌胃后4周,检测Cx43表达,阐明ARB类药物对大鼠心肌Cx43蛋白表达的影响。结果:1、心梗组室速或室颤发生率与假手术组相比明显增加(P<0.05)2、心梗大鼠心肌细胞磷酸化Cx43及总Cx43蛋白表达较假手术组降低(P<0.05);3、对照组大鼠与厄贝沙坦处理组大鼠,通过连续心电图监测,处理组室性心律失常的发生次数明显少于对照组。4、通过Western Blot方法检测Cx43蛋白表达情况,相比于陈旧性心肌梗死组,陈旧性心肌梗死+厄贝沙坦组Cx43蛋白表达增加,差异相比较有统计学意义(P<0.05)。结论:缺血可导致大鼠室性心律失常的发生明显增加,并且导致心肌细胞中Cx43的表达水平下降,使用厄贝沙坦后,陈旧性心肌梗死室性心律失常发生减少,且所致的心室缺血区Cx43含量减少的程度较陈旧性心肌梗死组减轻。第二部分:厄贝沙坦可逆转特异性低表达缝隙蛋白Cx43而增加的大鼠室性心律失常发生目的:探讨厄贝沙坦可逆转特异性低表达缝隙蛋白Cx43而增加的大鼠室性心律失常发生。方法:1、降低Cx43表达水平(Cx43基因的沉默作用)2、大鼠分为4组,包括对照组,厄贝沙坦组,注射慢病毒组即低表达组,以及注射慢病毒+厄贝沙坦。慢病毒注射至心脏边缘区。病毒注射含量为1*1011病毒数。造模结束后1)取各组心脏组织分离心肌细胞检测心肌细胞的MTT;2)取心脏组织制成切片检测心肌细胞的凋亡;3)取心脏组织进行Cx43的WB检测;4)Cx43与室性心律失常:通过连续心电图监测4周,对比Cx43表达降低大鼠与正常大鼠室性心律失常的发生次数,阐明Cx43与室性心律失常的关系。加用厄贝沙坦治疗后,观察室性心律失常发生。结果:1.通过Sh RNA慢病毒载体介导使SD大鼠心肌细胞Cx43基因沉默,从而降低Cx43表达水平。2.Cx43表达水平降低的大鼠心肌细胞较正常大鼠心肌细胞存活率,细胞活性降低,凋亡增高(P<0.05)3.厄贝沙坦使得特异性低表达Cx43增加的室性心律失常发生减少。结论:Cx43基因表达降低的大鼠较正常大鼠室性心律失常的发生明显增多。缝隙蛋白数量与室性心律失常呈负相关关系。厄贝沙坦通过Cx43的升高,降低了室性心律失常的发生。