第一章、Matrilin-2和-4在正常和深龋人牙髓组织中的表达研究。　　 目的：观察matrilin-2和-4蛋白及mRNA在正常和深龋人牙髓组织中的表达分布，探讨matrilin-2和-4与牙髓-牙本质复合体损伤修复的关系。　　 材料方法：分别收集因阻生或正畸治疗需要拔除的人健康完整第三恒磨牙和因深龋拔除的第三恒磨牙(患者年龄25-29岁)，制作牙髓组织切片，采用免疫组织化学法观察正常和深龋牙髓组织切片中matrilin-2和-4及DSP蛋白的表达分布；分别提取正常和深龋牙髓组织的总mRNA，采用荧光定量RT-PCR法检测正常和深龋牙髓中matrilin-2和-4及DSPPmRNA的表达差异。　　 结果：HE染色显示正常牙髓被牙本质包绕，其外层是具有牙本质形成功能的成牙本质细胞层；当牙体发生深龋时，牙髓组织的HE染色可见龋损下方的成牙本质细胞层增厚，其相邻的H(o)hl细胞层增殖明显，细胞分布密集，无炎症细胞浸润。免疫组织化学法观察到，正常牙髓组织中matrilin-2广泛分布于牙髓及成牙本质细胞层，而matrilin-4仅分布于成牙本质细胞层；深龋牙髓组织中，在龋损下方的成牙本质细胞层底层及相邻牙髓组织中，matrilin-2表达较弱，而matrilin-4呈阳性表达。荧光定量RT-PCR检测结果发现，与正常牙髓组织相比，在深龋刺激的牙髓组织中，matrilin-2mRNA表达下调，而matrilin-4mRNA表达上调，同时matrilin-4的表达与DSP呈现一致性。　　 结论：正常牙髓组织中matrilin-2广泛分布于牙髓及成牙本质细胞层而matrilin-4仅分布于成牙本质细胞层，深龋时牙髓组织中matrilin-2和-4蛋白和mRNA的表达较正常牙髓组织均有改变，因此推测matrilin-2和-4的表达与牙髓-牙本质复合体损伤修复有关。　　 第二章、Matrilin-2和-4在体外培养的HDPCs和成牙本质样细胞中的表达。　　 目的：检测matrilin-2和-4在体外培养的HDPCs及成牙本质样细胞中的表达，验证体内实验，为进一步研究matrilin-2和-4的在牙髓-牙本质复合体损伤修复过程中的表达奠定基础。　　 材料方法：酶消化法对HDPCs进行分离培养。HDPCs体外培养至第三代，更换为矿化诱导液，连续培养21天。采用茜素红染色法检测HDPCs向成牙本质样细胞分化后形成的矿化结节。采用免疫荧光法检测matrilin-2和-4及DSP蛋白在HDPCs及其分化的成牙本质样细胞中的表达。　　 结果：酶消化法获得的HDPCs呈长梭形克隆性生长。矿化诱导21天后茜素红染色可见矿化结节形成。免疫荧光法显示：矿化诱导前，在HDPCs中matrilin-2呈阳性表达，分布于胞浆，matrilin-4和DSP则呈阴性表达；矿化诱导21后，细胞中matrilin-2表达较弱，而matrilin-4和DSP表达呈阳性，分布于胞浆。　　 结论：获得体外培养的HDPCs系，并诱导其向成牙本质细胞分化。证实matrilin-2和-4在体外培养的HDPCs和成牙本质样细胞中的表达分布与体内实验一致。　　 第三章、Matrilin-2和-4在HDPCs向成牙本质细胞分化过程中的表达。　　 目的：研究matrilin-2和-4蛋白及mRNA在HDPCs向成牙本质细胞分化过程中不同时点的表达，探讨matrilin-2和-4参与牙髓-牙本质复合体损伤修复的机制。　　 材料方法：将第三代HDPCs体外矿化诱导21天，分别提取矿化诱导培养0、7、14、21天的细胞样本总蛋白和mRNA，采用western-blot和实时荧光定量RT-PCR分别检测matrilin-2和-4蛋白及mRNA在DPCs向成牙本质细胞分化过程中不同时点的表达。　　 结果：Matrilin-2蛋白在DPCs中的表达随矿化诱导时间延长呈下调趋势，其mRNA的表达在矿化诱导的前两周呈显著下调趋势，但第三周时其表达明显增高。Matrilin-4蛋白和mRNA的表达均随时间呈上调趋势。　　 结论：Matrilin-2和-4参与了HDPCs向成牙本质细胞分化的过程，推测matrilin-2和-4参与牙髓-牙本质复合体损伤修复的机制可能是早期参与调控DPSCs迁移和向成牙本质细胞分化，晚期调节牙本质基质的形成和聚集。