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目的:本论文旨在以梅花鹿鞭为原材料,研究其蛋白、肽类成分的制备工艺,在细胞水平上探讨其补肾健骨活性,筛选其中活性最佳组分;其次,基于酶工程技术和肽键热振荡理论对酶解前后、炮制前后鹿鞭活性-成分动态变化相关性分析,探究其药效物质基础;最后,进一步分离纯化最佳活性组分,解析鹿鞭补肾健骨活性成分,为鹿鞭今后在医药、保健产品等领域开发新应用提供理论依据。方法:首先采用响应面法优化鹿鞭蛋白肽类物质的提取工艺、酶解工艺、炮制工艺,进一步利用超滤分离技术将3种工艺的总提物按不同分子量各分为4个组分（总提组分、＞10 k Da组分、1～10 k Da组分、＜1 k Da组分）,考察不同超滤组分对TM3细胞、MC3T3-E1细胞活性的影响,筛选出最佳活性组分,并测定最佳组分对TM3细胞分泌睾酮（Testosterone,T）、双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）的影响和对MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活力、骨钙素（Osteocalcin,OCN）分泌量的影响;后续通过氨基酸分析以及高效液相（High performance liquid chromatography,HPLC）分析技术建立不同批次鹿鞭的化学指纹图谱,结合各组样品的补肾健骨活性,对鹿鞭酶解前后、炮制前后活性-成分动态变化相关性分析,得到鹿鞭酶解前后、炮制前后的标志性差异物;最后采用葡聚糖凝胶柱色谱Sephadex LH-20进一步分离纯化最佳活性组分,并在细胞水平上筛选出最佳活性馏分,通过液相-二极管阵列检测器-电喷雾电离-质谱（Liquid chromatography-Diode array detector-Electrospray ionization Mass spectrum/Mass spectrum,LC-DAD-ESI-MS~2）联用技术解析鹿鞭补肾健骨活性成分。结果:鹿鞭蛋白的提取工艺选用超声法提取,经响应面法优化后最佳提取工艺为:超声时间64 min,料液比1:14（g/m L）,超声功率300 W,此时蛋白含量为（40.12±0.18）%;酶解工艺选用碱性蛋白酶提取,优化后最佳酶解工艺为:酶解温度51℃,p H8.7,时间4.1 h,酶用量1300 U/g,此时水解度为（40.36±0.22）%;炮制工艺采用高温高压法提取,优化后最佳炮制工艺为:提取温度116℃,料液比1:18（g/m L）,提取时间57 min,粒度大小20目,此时肽含量为（48.54±0.32）%。最佳活性组分筛选结果显示3种不同工艺鹿鞭的各组分对TM3细胞、MC3T3-E1细胞均具有一定的增殖作用,其中鹿鞭天然寡肽、酶解寡肽、炮制品寡肽（＜1k Da）组分对TM3细胞、MC3T3-E1细胞的增殖作用最强;并且3种鹿鞭寡肽均能够促进TM3细胞分泌T、DHT的能力以及提高MC3T3-E1细胞ALP活力,增加OCN分泌量。鹿鞭酶解前后寡肽含量及活性对比结果显示,酶解寡肽含量、收率均高于天然寡肽,但天然寡肽活性优于酶解寡肽,酶解前后鹿鞭寡肽活性-成分动态变化相关性分析表明,对药效影响最大的化合物是Gly,Arg,Gly-Trp。鹿鞭炮制前后寡肽含量及活性对比结果显示,炮制寡肽含量、收率和活性均优于天然寡肽,炮制前后鹿鞭寡肽活性-成分动态变化相关性分析表明,对药效影响最大的化合物为Gly,Lys-Asn或Gln-Asn。鹿鞭天然寡肽、酶解寡肽、炮制品寡肽分离纯化后解析活性最佳馏分,共得到10个化合物:天然寡肽（Gln/Lys-Asn、Pro-Thr、Gly-Trp、Leu/Ile-Lys/Gln-Pro）;酶解寡肽（Val-Phe、Val-Ser、Gly-Trp）;炮制品寡肽（Ala-His、Lys/Gln-Asn、Pro-Asn-Ala-Lys/Gln）。结论:本文经筛选得到了鹿鞭生品、酶解品、炮制品具有补肾健骨活性的主要物质基础为寡肽（＜1 k Da）组分;鹿鞭酶解后活性略降低,但寡肽含量及收率明显升高,可以考虑用酶解寡肽作为天然寡肽的替代品;鹿鞭炮制后活性增强,寡肽含量也有所增加,推测可能是由于鹿鞭炮制后肽键裂解生成了更多小分子肽,活性寡肽类成分增加,初步探究了酶解、炮制对鹿鞭补肾健骨活性的影响;鹿鞭生品、酶解品、炮制品寡肽组分分离纯化后共得到17组馏分,筛选出补肾健骨活性最佳馏分,共解析出10个化合物:Gln/Lys-Asn、Pro-Thr、Gly-Trp、Leu/Ile-Lys/Gln-Pro（生品馏分）;Val-Phe、Val-Ser、Gly-Trp（酶解品馏分）;Ala-His、Lys/Gln-Asn、Pro-Asn-Ala-Lys/Gln（炮制品馏分）,因此确定了鹿鞭的药效物质基础,为鹿鞭在补肾健骨方面产品的开发和应用提供了科学的理论依据。