【摘 要】
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目的研究脐带间充质干细胞外泌体（Exosomes of umbilical cord mesenchymal stem cell,uc MSC-exos）对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblast,HSF）增殖活性和迁移能力等的影响;初步探讨uc MSC-exos对小鼠急性皮肤创面愈合的影响及相关机制。方法用超高速离心法提取uc MSC-exos,经透射电镜观察、Western
【基金项目】
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空军医大学首批临床科研项目（脐带间充质干细胞外泌体促进皮肤创面愈合的临床研究,课题编号:2021XB008）; 军委后勤保障部重点开放项目（间充质干细胞源性外泌体对皮肤损伤修复研究,课题编号:BKJ21J016）; 军事科研生态优化建设项目（高原高寒缺氧条件下官兵皮肤损伤保护科普,课题编号:21-ZLXD-02-00-01-002-03）
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目的研究脐带间充质干细胞外泌体（Exosomes of umbilical cord mesenchymal stem cell,uc MSC-exos）对人皮肤成纤维细胞（human skin fibroblast,HSF）增殖活性和迁移能力等的影响;初步探讨uc MSC-exos对小鼠急性皮肤创面愈合的影响及相关机制。方法用超高速离心法提取uc MSC-exos,经透射电镜观察、Western blot检测外泌体表面标志物CD63和TSG101和粒径分析鉴定外泌体。体外培养3～5代人皮肤成纤维细胞（HSF）,分别用含1、2μg/ml外泌体的高糖DMEM培养基处理HSF（分别为1、2μg/ml组）,高糖DMEM培养基常规培养HSF为阴性对照组,CCK8法检测uc MSC-exos对HSF增殖活力的影响。使用划痕试验检测uc MSC-exos（2μg/ml）对HSF迁移能力的影响。使用实时荧光定量PCR检测uc MSC-exos干预后HSFⅠ型胶原蛋白、纤连蛋白、血管内皮生长因子m RNA表达的改变。取24只8周龄雄性BALB/c小鼠构建全层皮肤损伤小鼠模型,按随机数字表等分为uc MSC-exos组和PBS组。术后第0、4、7、10、14天观察两组小鼠创面并计算创面残余面积百分比,术后第7、14天创面组织取材后行HE和Masson染色,以观察皮肤组织结构变化。术后第14天收集两组小鼠创面皮肤组织,实时荧光定量PCR和Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白、血管内皮生长因子m RNA和蛋白的表达水平。免疫组织化学检测CD31的表达水平。3组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,小鼠创面残余面积百分比采用双因素重复测量方差分析,其他实验数据采用非配对t检验分析。结果透射电镜下,uc MSC-exos呈椭圆形,直径100 nm左右;Western blot检测显示,uc MSC-exos表面蛋白CD63、TSG101表达阳性;粒径分析显示,96.2%uc MSC-exos直径为30～150 nm。CCK8实验显示,1μg/ml组和2μg/ml组HSF相对活力（0.97±0.05、1.08±0.07）均显著高于阴性对照组（0.71±0.04）,t值分别为2.00、7.05,均P＜0.05,且2μg/ml组HSF相对活力显著高于1μg/ml组,t=5.09,P＜0.05。划痕实验显示:与PBS组相比,uc MSC-exos组细胞的迁移能力明显增强（t=19.80;P＜0.01）。实时荧光定量PCR结果显示:uc MSC-exos组Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白、血管内皮生长因子m RNA和蛋白的表达均显著高于PBS组（均P＜0.05）。术后第4、7、10、14天,uc MSC-exos组创面残余面积百分比均显著低于PBS组（均P＜0.05）。HE和Masson染色显示,与PBS组相比,uc MSC-exos组小鼠创面新生皮肤组织中毛囊、腺体以及肉芽组织更丰富且有新生血管形成,胶原排列也更整齐。实时荧光定量PCR和Western blot实验显示,uc MSC-exos组Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白、血管内皮生长因子m RNA和蛋白的表达均显著高于PBS组（均P＜0.01）。免疫组织化学实验显示:uc MSC-exos组CD31蛋白的阳性表达细胞数显著高于PBS组（P＜0.05）。结论皮下注射uc MSC-exos可以促进小鼠急性皮肤创面愈合,可能与uc MSC-exos促进小鼠创面组织中细胞外基质、血管内皮生长因子和CD31的合成,及促进HSF增殖、迁移以及合成细胞外基质有关。
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