第一部分精子冷冻环无保护剂玻璃化冷冻方法的实验研究目的通过探讨冷冻环无保护剂玻璃化冷冻微量精子的可行性,试图寻找一种适合于睾丸或附睾微量精子的冷冻方法。方法正常标本上游处理后分别进行慢速冷冻和冷冻环无保护剂的玻璃化冷冻,复苏后分别从活动率及电镜下超微结构等指标来比较两种冷冻方法的效果。结果两种方法冷冻后其活动率之间差异无显著性(44.5% vs 43.5%, P>0.05),但均较未冷冻时明显下降(44.5% vs 43.5% vs 88.5%, P<0.001)。超微结构亦较未冷冻时发生了一定的改变,但核结构基本保持完整。结论精子冷冻环无保护剂的玻璃化冷冻是一种简单、方便而有效的冷冻方法;冷冻环有望成为适合于睾丸或附睾微量精子冷冻的一种新型载体。第二部分微滴法无保护剂玻璃化冷冻正常精子的可行性探讨目的探讨在不添加冷冻保护剂的情况下微滴法玻璃化冷冻正常精子的可行性方法收集16份正常精液标本,上游处理后分别进行慢速冷冻和微滴法冷冻,微滴法即用拉细巴氏管将标本形成10ul的液滴,直接投入液氮内冻存,复苏后镜检其活动率。结果两种方法冷冻后其活动率之间差异无显著性(40% vs 37.5%, P>0.05),但均较未冷冻时明显下降(40% vs 37.5% vs 85%, P<0.001)。结论无保护剂的微滴法玻璃化冷冻正常人类精子可以取得较理想的结果;但需进一步探索以提高其复苏率。第三部分微滴法无保护剂玻璃化冷冻PESA精子的可行性探讨目的探讨微滴法无保护剂玻璃化冷冻PESA精子的可行性方法收集12份PESA精子标本,洗涤处理后进行无保护剂的微滴法冷冻,用拉细巴氏管将标本形成10ul的液滴,直接投入液氮内冻存,复苏后镜检其活动率。结果将复苏后活动精子数大于30个作为复苏成功的指标,12份标本有8份复苏成功,复苏成功率为66.7%。结论微滴法无保护剂玻璃化冷冻PESA精子可以取得一定的成功率;无保护剂的微滴法是微量精子的一种有效的冷冻方法。