背景及目的：　　结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一，无论在中国还是世界范围内其发病率和死亡率均排在前列。早期诊断相对困难、晚期容易发生肝转移等是其死亡率较高的主要原因。肿瘤晚期转移与血管生成密切相关，虽然基于血管内皮生长因子（VEGF）诱导血管生成的抗肿瘤转移治疗已在临床普遍应用，但仍存在一些问题。因此，寻求抗肿瘤血管生成和抗转移治疗新途径十分必要。既往研究表明，缺氧诱导因子（HIF）-1α在肿瘤缺氧微环境中促进肿瘤的血管生成，与肿瘤的侵袭、转移、耐药、放疗抵抗等相关。结直肠癌中HIF-1α也有明显诱导肿瘤血管生成的作用。但HIF-1α调控肿瘤血管生成除通过VEGF途径外，是否还存在更重要的调控通路尚不清楚。　　MEF2D是肌细胞增强因子（MEF）2家族中的成员之一，是参与神经、肌肉发育的重要转录因子，目前发现其可参与肿瘤的细胞增殖、侵袭、转移等过程。但在结直肠癌中研究相对较少，我们前期研究显示结直肠癌中 MEF2D 能促进肿瘤细胞的上皮间质转化（EMT），同时也发现在缺氧条件下结直肠癌中的MEF2D与HIF-1α表达呈同步升高，提示二者可能与结直肠癌的转移有一定相关性。但 MEF2D 是否参与缺氧条件下 HIF-1α诱导的结直肠癌血管生成？两者间的相互作用机制如何？目前仍不清楚。为此，本研究分为三部分展开：第一部分采用 免疫组织化学染色在113例人结直肠癌临床样本中观测MEF2D、HIF-1α蛋白表达特点及其与微血管密度（MVD）的关系，探讨其临床意义；第二部分以人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）和小鼠移植瘤为模型，通过体外培养结直肠癌细胞干预 MEF2D 表达观察其 HUVEC 增殖、迁移、成管的影响，体内移植瘤观测干预MEF2D表达对肿瘤生长与瘤体内MVD、血红蛋白的影响，探讨 MEF2D 在促血管生成中的作用；第三部分在模拟缺氧条件下观察结肠癌细胞中MEF2D和HIF-1α表达的相互影响，两者不同表达状态对HUVEC迁移、成管的影响，以及干预 MEF2D 表达对下游细胞因子的作用，探讨 MEF2D 在参与缺氧条件下HIF-1α促血管生成的作用及其机制。　　主要结果和结论如下：　　1. 人体结直肠癌组织中 MEF2D 表达水平与 HIF-1α表达和 MVD 计数正相关，提示MEF2D与HIF-1α和结直肠癌血管生成有关；MEF2D表达与肿瘤TNM分期显著正相关，提示 MEF2D 可能参与结直肠侵袭转移；Kaplan-Meier 生存曲线分析显示MEF2D、HIF-1α和MVD计数与患者生存时间呈负相关，其中MEF2D/HIF-1α/MVD三者均升高组预后最差，提示 MEF2D 高表达可能预示结直肠癌预后不良， MEF2D/HIF-1α/MVD联合应用对评估其预后可能更有价值。　　2. MEF2D在6株结直肠癌细胞系（DLD-1、SW480、HT29、SW620、HCT116、Caco-2）的表达存在差异，其中HCT116和Caco-2细胞高表达MEF2D，其细胞外基质（CM）促进人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）迁移的作用强，低表达 MEF2D 的DLD-1和SW480细胞，其作用相反。敲低HCT116和Caco-2细胞的MEF2D表达，其CM促进HUVEC增殖、迁移、成管的能力较对照组显著降低，而过表达DLD-1和SW480细胞的MEF2D，其CM促进HUVEC增殖、迁移、成管的能力显著升高，提示MEF2D可能具有在体外调控HUVEC的血管生成作用；干扰HCT116细胞的MEF2D表达，小鼠皮下移植瘤瘤体体积、重量、血红蛋白含量和 MVD 计数均较对照组显著降低，而过表达 SW480 细胞的 MEF2D，移植瘤的以上观测指标较对照组显著增高，进一步证实MEF2D能促进结直肠癌细胞增殖和肿瘤血管生成。　　3. 缺氧条件下，动态检测SW480和DLD-1细胞的HIF-1α和MEF2D蛋白含量，显示HIF-1α峰值时间早于MEF2D，提示MEF2D可能位于HIF-1α的下游；干扰和过表达SW480和DLD-1细胞的HIF-1α后，二者的MEF2D蛋白及RNA水平呈一致性改变，提示MEF2D表达可能受HIF-1α的调控；缺氧状态下，干扰MEF2D和HIF-1α表达也可使HUVEC成管和迁移数量显著降低，而干扰HIF-1α并过表达MEF2D其数量可显著升高，正常状态下，过表达 HIF-1α可以使 HUVEC 成管和迁移数量显著增高，过表达HIF-1α并干扰MEF2D其数量则显著降低，提示MEF2D可能是HIF-1α诱导血管生成通路中的关键下游分子。　　4.实时定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot检测干扰MEF2D的HCT116细胞和过表达MEF2D的SW480细胞的CM中的血小板衍生生长因子（PDGF）-BB、PDGF-C、胎盘生长因子（PLGF）、乳脂球因子（MFG）-E8、肿瘤坏死因子受体超家族成员（TNFRSF）6B，显示干扰 MEF2D 后以上 5 种血管生成因子表达显著降低，而过表达 MEF2D 则显著升高，提示此 5种血管生成因子的转录可能受 MEF2D 的影响，进一步提示MEF2D参与血管生成可能通过调控多种血管生成因子发挥作用。