背景：慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是当今世界危害人类健康的重要疾病,其患病率高,大约5-13%,在年龄大于40岁的人群中,患病率大约8-13%。香烟暴露和室内空气污染是COPD最重要的致病因素,而且随着吸烟率的持续上升,COPD的患病率也逐渐上升,特别是妇女和发展中国家。吸烟者罹患COPD的发病率接近20%,而不吸烟者只有4%。因此,预计到2030年,COPD将逐渐上升为第三位的致死病因,并给很多国家造成了很大的经济负担。最近的研究显示,慢性阻塞性肺病不仅是肺部的异常炎症反应,而且还是一种全身的炎症反应,包括系统性氧化应激,循环炎症细胞的激活和循环中炎性细胞因子水平的增加。COPD患者肺部的局部炎症,可以通过直接释放细胞因子和趋化因子,或间接通过激活外周血炎症细胞来影响其他组织器官。因此,COPD不但影响中小气道、肺实质和肺血管,而且引起很多的合并症,例如心血管疾病,糖尿病,抑郁,体重减轻和肌肉功能异常。目前的研究证明,多种炎症因子参与了COPD的发病发展过程,导致了小气道的纤维化和肺泡的破坏。综上所述,炎症反应在COPD发病机制中有着重要的地位,针对炎症介质的治疗可能是COPD有效的抗炎治疗作用点。但因为太多炎症介质参与了COPD的炎症过程,针对单一的炎症介质并不能有很多的临床获益,所以明确炎症介质的特征和它们的相互作用,找出导致炎症反应的炎症介质源头,对COPD的抗炎治疗是至关重要的核因子-kappaB (nuclear factor-kappaB, NF-κB)是一种与许多基因启动子上κ B序列特异性结合而启动基因转录功能的蛋白。在免疫应答、炎症反应、细胞分化和生长、细胞黏附和凋亡等方面发挥着重要作用。在非激活状态下,NF-κB与I κ B非共价结合形成复合物,在胞浆内以无活性的二聚体形式存在。当活化信号(包括TNF-α、LPS、氧化剂、氧自由基、放射线、紫外线、病毒及其代谢产物等)暴露时,NF-κB与I κ B解离,促使NF-κB活化,活化的NF-κB进入核内,结合至DNA反应元件启动子,激活炎症基因的转录,诱导细胞因子、粘附分子、血管活性调节因子上调,进一步使得下游细胞因子浓度升高,包括白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)。因此NF-κB参与炎症反应的启动,而且很多研究已证明,NF-kB在COPD的发病机制起着重要作用,而作为其下游产物的IL-6,也被证实在COPD的炎症反应中起着重要作用。巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor, MIF)作为一种前炎症因子,与多种炎症性疾病及自身免疫性疾病的发生及进展有关,其通过NF-kB通路,诱导产生大量的与COPD发病过程中相同的炎症介质,从而在炎症性疾病中起重要作用；而以往的研究表明NF-kB与COPD发病密切相关,由此推断MIF可能与COPD相关,并在COPD发病过程中起着关键作用。本研究通过测定COPD患者外周血MIF、NF-κB、IL-6的表达水平,旨在探讨MIF在COPD发病机制中的可能作用。目的：研究慢性阻塞性肺疾病患者外周血中巨噬细胞移动抑制因子的表达水平及其意义。分析MIF、NF-kB、IL-6三者是否相关,初步判断它们分别作为炎症反应过程中上、中、下游产物在COPD病程中的作用。分析MIF、NF-kappaB、IL-6三者与慢性阻塞性肺病患者FEV1%是否相关。方法：研究对象分为3组：慢性阻塞性肺病急性加重期组、稳定期组和对照组。所有患者均接受肺功能检查。排除标准：自身免疫性疾病(类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、血管炎)、恶性肿瘤、泌尿系疾病(急慢性肾小球肾炎、肾病综合症)、消化道疾病(肝炎、肝硬化、炎症性肠病)、冠心病(包括心绞痛、心肌梗死)、呼吸道疾病(支气管哮喘、过敏性鼻炎、活动性肺结核)。入选标准：COPD按2010GOLD制定的COPD诊断标准。对照组无COPD,并无排除标准中相应疾病,在性别、年龄、吸烟构成等一般资料上与COPD组相匹配。选择2012年2月至2012年7月慢性阻塞性肺病急性加重期及稳定期患者各25例,无慢性阻塞性肺病的对照组25例,抽取静脉血,使用ELISA方法测定血浆MIF、IL-6的浓度,流式细胞术检测细胞内MIF阳性的CD4+、CD8+T淋巴细胞的比率,实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)MIF-mRNA的表达水平,Western blot测定PBMC NF-κB含量。统计学分析采用SPSS13.0软件,以P<0.05为差异有统计学意义。所有数据用x±s表示。先进行正态分布检测,如非正态分布,进行排秩,排秩后采用Kruskal—Wallis检验。正态分布数据,进行one-way ANOVA检验,若方差齐,进一步的两两比较采用LSD检验；若方差不齐,采用Welch检验,进一步的两两比较采用Dunnett’sT3检验；相关性分析：正态分布数据采用Pearson直线相关性分析,非正态分布数据采用Spearman相关性分析。结果：1.急性加重期组25例,其中男20例,女5例,平均年龄(62.2±4.9)岁,平均病程7.78年,FEV15pred51.9±8.2,FEV1/FVC56.8±5.7;稳定期组25例,其中男19例,女6例,平均年龄(59.2±5.1)岁,平均病程6.56年,FEV1%pred53.4±7.3,FEV1/FVC60.9±4.4;对照组25例,其中男20例,女5例；平均年龄(59.4±4.6)岁,FEV1%pred87.8±5.6,FEV1/FVC82.5±11.3;均有吸烟史。2.淋巴细胞亚群表达MIF的结果：CD4+MIF+T淋巴细胞阳性率(CD4+MIF+T淋巴细胞/CD4+T淋巴细胞的百分比)在急性加重期组、稳定期、对照组分别为(76.81±14.65)%,(60.09±16.03)%、(65.88%±16.64)%,急性加重期组相对于稳定期组、对照组均有明显升高,差异有统计学意义(P值分别为0.002,0.037),稳定期组相对于对照组并没有获得统计学差异(P=0.302)；COPD稳定期组,CD4+MIF+T淋巴细胞阳性率与FEV1%负相关(r=-0.521,P=0.008)；CD8+MIF+T淋巴细胞阳性率(CD8+MIF+T淋巴细胞/CD8+淋巴细胞的百分比)在急性加重期组、稳定期、对照组分别为(76.94±19.96)%、(58.48±25.28)%、(55.92%±29.90)%,急性加重期组相对于稳定期组、对照组均有明显升高,差异有统计学意义(P值分别为0.010,0.012),稳定期组相对于对照组并没有获得统计学差异(P=0.975); COPD稳定期组,CD8+MIF+T淋巴细胞阳性率与FEV1%负相关(r=-O.663,P<0.01)。3.血浆MIF的检测结果：急性加重期组、稳定期组、对照组血浆MIF浓度分别为128.94±30.31pg/ml,119.57±17.64pg/ml,123.22±33.55pg/ml,各组间均无统计学差异(F=0.786,P=-0.460)。4.血浆MIF与MIF+T淋巴细胞的相关性结果：血浆MIF与CD4+MIF+T淋巴细胞阳性率无相关性,r值为0.029,P值为0.803。血浆MIF与CD8+MIF+T淋巴细胞阳性率也无相关性,r值为0.142,P值为0.224。5. PBMC MIF-mRNA的表达结果：急性加重期组、稳定期、对照组分别为0.0303±0.03075,0.0140±0.01819,0.0186±0.00711,急性加重期组相对于稳定期组、对照组均有明显升高,差异有统计学意义(P值分别为0.004,0.036)。稳定期组相对于对照组并没有获得统计学差异(P=0.422)。6.MIF基因表达与蛋白表达的相关性分析结果：PBMC MIF的基因表达与CD4+MIF+T淋巴细胞阳性率及CD8+MIF+T淋巴细胞阳性率结果一致,相关分析显示MIF-mRNA与CD4+MIF+T淋巴细胞阳性率(r=0.323,P=0.010),与CD8+MIF+T淋巴细胞阳性率(r=0.354,P=0.004)均成正相关；与血浆MIF无相关(r=0.087,P=0.459)。7. NF-κB在COPD急性加重期组、稳定期组、对照组的表达分别为0.9659±0.0754,0.9496±0.1439,0.9182±0.0513,3组之间无统计学差异(F=1.675,P=0.194)；以慢性阻塞性肺病的严重程度分级(Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级),NF-κB在3级患者中也无统计学差异。8.IL-6在COPD急性加重期组、稳定期组、对照组浓度(pg/ml)分别为31.88±19.46,44.46±16.18,23.86±9.93,在COPD急性加重期组、稳定期组及对照组3组间具有统计学的差异(x2=24.457,P<0.01),3组的平均秩次分别为37.94,54.54,24.52,根据平均秩次进一步推断,稳定期组浓度最高,其次为急性加重期组；而在COPDⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级3组间,IL-6也具有统计学的差异(x2=10.328,P=0.006),3组的平均秩次分别为20.48,35.54,29.67,根据平均秩次进一步推断,Ⅲ级、Ⅳ级明显高于Ⅱ级。无论是COPD稳定期患者还是急性加重期患者,血清IL-6的表达水平均与FEV1负相关,r分别为-0.497,-0.613,P值分别为0.011,0.001。9.CRP在COPD急性加重期组、稳定期组、对照组浓度(mg/L)分别为28.13±38.56,8.21±16.31,2.86±4.85,在COPD急性加重期组、稳定期组及对照组3组间具有统计学的差异(x2=33.051,P<0.01),3组的平均秩次分别为55.48,38.46,20.06,根据平均秩次进一步推断,急性加重期组浓度最高,其次为稳定期组。10.MIF与NF-κB、IL-6的相关性分析结果：在COPD稳定期组,CD4+MIF+T淋巴细胞阳性率、CD8+MIF+T淋巴细胞阳性率与NF-κB相关,r分别为0.497,0.854,P值分别为0.036,<0.01；不论COPD急性加重期组还是稳定期组,MIF(包括基因、蛋白)与IL-6之间均无相关。结论：1.CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞MIF表达增多在COPD的急性加重过程中起作用,但不直接参与慢性阻塞性肺病的全身慢性炎症。2. COPD患者外周血单个核细胞NF-κB无明显升高,提示其并不直接参与慢性阻塞性肺病患者的全身慢性炎症。3. COPD稳定期患者外周血IL-6表达明显增加,表明其与COPD的慢性炎症相关,在气道炎症、气道阻塞发生发展过程中可能具有重要作用；无论是COPD稳定期患者还是急性加重期患者,血清IL-6的表达水平均与FEV1%负相关,在一定程度上反映气道阻塞的严重程度。