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宫颈癌是妇科常见肿瘤之一，细胞周期失调被认为在宫颈癌的形成过程中发挥了重要作用。p16是一种抑癌基因。p16蛋白在细胞周期中通过抑制CDK4/6与cyclinD的结合而起着负调控的作用。研究表明宫颈癌细胞中的p16表达异常，但文献报道的结果并不一致，且其在宫颈癌发生过程中的作用也不清楚。因此，本实验的目的是观察并进一步明确p16在宫颈浸润癌及其前期病变中的表达状况和趋势，探讨其在宫颈癌早期诊断中的应用价值，研究高表达的p16在宫颈鳞状上皮细胞癌中所起的作用，探讨p16在宫颈鳞状细胞上皮癌中高表达的机制，为p16在宫颈癌生物选择性治疗中的应用提供依据。
[方法]采用SP免疫组化法检测来自石蜡切片、冰冻切片、和细胞涂片的宫颈标本的p16表达情况。石蜡标本包括宫颈炎19例，低度上皮内瘤变(CervicalIntraepithelialNeoplasia,CINⅠ)15例，高度CIN(CINⅡ、Ⅲ)42例，癌旁CIN16例，浸润癌66例。新鲜冰冻标本包括宫颈炎10例，浸润癌20例。涂片标本包括5例宫颈细胞涂片。按细胞着色情况将浸润癌中阳性病例分为p16低表达组、p16高表达组。用SP免疫组化法分别检测两组中总体pRb(包括未磷酸化、低磷酸化、高磷酸化)的表达情况，及代表pRb磷酸化水平的bcl-2、p73的表达情况；根据冰冻切片免疫组化着色情况，选取p16低表达、高表达病例，用western-blot检测新鲜组织中p16总蛋白表达量，免疫共沉淀方法检测组织中p16与CDK4的结合情况，及与CDK4结合的p16蛋白量。然后计算p16低表达，p16高表达病例中p16与CDK4的结合率，并比较p16功能的改变。作为研究p16高表达机制的对照，用SP免疫组化检测5例视网膜母细胞瘤10例乳腺癌及癌旁正常组织石蜡切片中p16的表达情况。随机抽取27例宫颈石蜡标本，用显微切割的方法切取宫颈石蜡切片中的病变组织，用PCR方法检测其中高危型HPV的感染情况。
[结果]免疫组化结果：按上述病例标本顺序(依次是宫颈炎、低度CIN、高度CIN、癌旁CIN、浸润癌)，石蜡标本中p16表达阳性率分别是0(0/19)，40％(6/15)，78.6％(33/42)，81.3％(13/16)，92.4％(61/66)，除癌旁CINp16阳性表达率与浸润癌组的p16表达率差别无显著性外(χ2检验，P＞0.05)，其余各组的p16表达率均与浸润癌组的p16表达率的差异均有统计学意义(χ2检验，P＜0.05)；冰冻切片中宫颈慢性炎组的p16表达阳性率为0(0/10)明显低于浸润癌组的90％(18/20)(Fisher确切概率法，P＜0.001)；宫颈涂片标本，HE染色证实均有核异型细胞。各例中异型细胞p16免疫细胞化学染色均阳性。宫颈癌p16低表达组，p16高表达组中pRb阳性率分别为23.3％(7/30)、45.2％(14/31)，差异无统计学意义(χ2检验，P＞0.05)；p16低表达组中bcl-2、p73阳性率分别为50％(15/30)、23.3％(7/30)低于p16高表达组的83.9％(26/31)、64.5％(20/31)(χ2检验，P＜0.05)；免疫共沉淀结果显示，宫颈癌中p16与CDK4结合。通过western-blot检测p16低表达，p16高表达病例中p16与CDK4结合率分别为(88.5±1.9)％、(85.3±4.3)％，差异无统计学意义(独立样本t检验，P＞0.05)；p16、pRb在5例视网膜母细胞瘤中皆无表达，乳腺癌p16阳性率为50％(5/10)，癌旁正常组织为20％(2/10)，两者之间差别无统计学意义(χ2检验，P＞0.05)。PCRHPV检测及分型结果：随机抽取的宫颈石蜡切片中均有高危型HPV(HPV16、18)感染。
[结论](1)p16在宫颈浸润癌及其前期病变细胞中表达增高。(2)由于p16免疫组化染色阳性不出现在宫颈正常上皮细胞，仅出现在上皮内瘤变和浸润癌细胞中，且宫颈涂片的核异型细胞均呈阳性表达，提示p16免疫组化染色可作为一个宫颈癌及其前期病变的辅助病理诊断标记。(3)高表达的p16在宫颈癌中仍能与cyclinD竞争结合CDK4，且高表达致其总体功能增强。(4)宫颈癌中p16表达增高没有降低pRb的磷酸化水平，没有抑制E2F的释放，没有发挥抑癌基因的作用，也不影响Rb蛋白的表达。但是为什么有功能的p16却未能阻止pRb的磷酸化，其原因和机制还需要进一步的研究。(5)高危型HPV感染及其导致的Rb蛋白的失活，是p16在宫颈癌中高表达的可能重要原因之一。