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消化系统恶性肿瘤中，原发性肝癌(Primary Hepatic Carcinoma,PHC)作为最常见、恶性程度较高的肿瘤，在全世界恶性肿瘤的发生率中位列第5，而在我国癌症发生率中位列第3，且呈逐年上升趋势[1-5]。全世界有一半以上的肝癌患者在中国，二十世纪初期中国肝癌每年新发病例有30.6万，死亡病例有30万，在癌症中是仅次于肺癌的第二号杀手[6]，由于其起病隐匿，迅速进展的特征，大多数患者一经发现已为晚期，预后极差，且呈逐年上升趋势，在二十世纪第一个十年我国每年的PHC患者发病与死亡人数已经上升到40.2万和37.2万[7-8]。越早期PHC的患者越能获得有效的根治性手术治疗，大量文献显示早期诊断、早期治疗的PHC患者预后存活时间及生存质量明显提高，因此其早期诊断及早期手术治疗仍是目前改善患者生存预后最有效的方法[9]。为此我们有必要深入探索有价值的肝癌特异性肿瘤标志物，从而为提高PHC的早期诊断率及手术治疗术后疗效评估及监测奠定基础。
肿瘤异常糖链糖蛋白(TAP )是由前苏联科学院院士乌克兰科学院院士kostyantyantin.A.Calakhin教授发现的一种组合肿瘤标志物检测技术，是恶性肿瘤生成及新陈代谢过程钟产生的异常糖蛋白-钙组蛋白复合物，主要原理是各种致癌因素作用于机体健康细胞的DNA，从内在或者外在的因子中分离出一种糖链结构异常的糖蛋白与钙组蛋白复合物，较多的在外周血中存在，并在外周血液中检测到，目前在头颈部肿瘤、消化道肿瘤、胸腔肿瘤、生殖泌尿系肿瘤、血液系统肿瘤及神经系统肿瘤中广泛应用，但尚无公认的标准。本研究拟检测末梢血TAP在肝细胞癌患者中的表达情况，观察其在肝癌诊断中的临床意义，并分析末梢血TAP与肝癌患者临床病理特征之间关联的相关因素。同时对于中晚期肝癌患者，已失去手术切除及局部治愈性微创治疗的良好时机，仅有10~15%可以进行外科手术切除，而肝内转移的发生率在首次进行手术切除的患者中高达50%，哪怕进行了手术切除，其复发率仍很高[10-11]。对于已经失去治愈性手术机会的患者来说，TACE手术可有效延长肝癌患者的生存期，但整体生存期仍较短[12]。本研究也通过对肝癌患者术前及术后(手术治疗方式包括超声引导下肝癌微波固化治疗术PMCT，外科切除术，肝癌射频消融术，肝动脉栓塞化疗术TACE及DEB-TACE等)的TAP值进行收集分析，了解TAP值在术后的疗效评估价值，并进一步探讨其在肝癌患者术后复发及转移的预测价值。
【目的】
1、通过检测末梢血TAP在PHC患者、肝硬化患者的含量了解TAP在肝癌患者中的表达水平及其临床特征及意义；
2、对进行手术治疗的PHC组患者进行随访，分析PHC患者手术前后的异常糖链蛋白(TAP)的水平变化，并与AFP进行比较探讨其在肝癌术后疗效评估中的价值，且术后TAP与PHC患者无复发生存期相关性的研究进行了初步的探讨。
【方法】
1、选取2015年1月至2016年9月我院收治的新诊断为肝癌患者，经过以下排除标准后筛入79例为肝癌组(PHC组)，排除标准：未获得基线AFP及TAP值；伴随有肝外的恶性肿瘤；既往有恶性肿瘤治疗史；非肝病所致的AFP升高；特殊类型的AFP正常的肝癌，如纤维板层样肝癌等。其中73例患者为男性，6例患者为女性，所纳入患者年龄范围为41~78岁，其中平均年龄为(62.3±10.9)岁，其中HBV相关肝癌患者50例，HCV相关肝癌患者15例，酒精性肝硬化所致肝癌患者9例，患者肝癌诊断均经B超、CT和病理组织学检查确诊(初诊断均符合2011版原发性肝癌诊疗指南，后期数据分析根据2017版原发性肝癌诊疗指南)，其中Ia-IIb期肝癌患者为56例，均接受手术治疗(手术治疗方式包括超声引导下肝癌微波固化治疗术PMCT，外科切除术，肝癌射频消融术，肝动脉栓塞化疗术TACE及DEB-TACE等)，对患者接受手术治疗前、手术治疗后1周以及手术治疗后1个月的指端末梢血TAP进行收集分析。
同期收治的肝硬化组患者77例，其中HBV相关肝硬化患者41例，HCV相关肝硬化患者17例，酒精性肝硬化患者13例，男性患者为59例，女性患者为18例，所纳入患者年龄范围为33~76岁，平均(55.6±10.0)岁。
2、TAP检测需采集患者空腹末梢静脉血2ml，制作成厚薄均匀的血涂片，血涂片面积应大于载玻片三分之二；
3、在恒温恒湿的(温度18-25℃，相对湿度45-60%)工作环境中放置10分钟；
4、取TAP检测试剂液在血涂片上垂直方向均匀滴加3滴(每滴约50ul)，形成3个斑点(10-12mm/Φ)，平放静置待干约2小时，待其自然干燥，直至有圆形的“斑点”形成，则可应用TAP集成阅片仪对标本进行检测，对特异形态的凝聚物进行寻找；
5、平场消色差物镜(4倍)作为肿瘤异常蛋白检测系统图像分析仪主要的检测工具，有三个斑点显示在显示器上，进行扫描观察异常形态的凝聚物，必要时可联合高倍镜进行进一步分析。若TAP正常，则不存在明显的凝聚物，凝聚物面积保持为0~121μm2；若TAP异常，则存在明显的凝聚物，凝聚物面积保持为121μm2以上，若凝聚物面积在225μm2及以上，则提示存在面积较大的凝聚物。收集入组患者的TAP检测结果录进行分析。
6、AFP检测方法为：检测所应用的仪器为PhilipsSHK5500型全自动电化学发光免疫分析仪，所应用的检测试剂为甲胎蛋白测定试剂盒(Immulite 2000 AFP)，检测方法按照试剂盒说明书进行操作。
7、统计学软件为SPSS17.0。x±s表示计量数据，两组间数据行t检验，多组间数据行F检验；[n，(%)]表示计数资料，行X2检验；P＜0.05表示有统计学意义。多因素分析采用Logistic回归分析，生存分析应用Kaplan-Meier的Log-rank检验，应用GraphPadPraism5.0开展数据处理。
【结果】
1、两组基线值比较
在纳入的156例受试者中(肝癌患者79例及肝硬化患者77例)，病因为慢性HBV感染患者91例，HCV感染患者32例，酒精性肝病22例，病因不明患者7例，在肝癌组中慢性乙型肝炎病毒感染为首要致病因素，丙型肝炎病毒感染次之，酒精性肝炎所致肝癌患者比例在第三名，肝硬化组患者病因分析与肝癌组患者呈现相同趋势，但酒精所致肝硬化较肝癌组更常见，但两组无显著统计学差异，肝硬化组中免疫相关性肝硬化患者有3例，免疫相关性肝病为基础发生肝癌的患者仅1例，肝癌组患者较肝硬化组男性患者发病率更高(92.4%vs76.6%)。
2、同时根据两组患者纳入的TAP及AFP数据进行初步分析，比较两组患者的AFP及TAP基线值，结果显示，相较于肝硬化组，肝癌组患者的TAP和AFP水平明显更高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
3、对肝癌进行诊断时，两组患者进行AFP及TAP单独检测及联合检测，单独指标进行检测时，TAP灵敏度更高(71%vs68%)，但AFP单一检测结果在特异度及AUC均较TAP组更高，但差异不具有统计学意义(P＞0.05)；但与单独检测相比较，AFPandTAP组特异度及AUC(0.77)均高于其他三组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
4、相较于手术治疗前，肝癌组术后1周TAP及AFP均有不同程度升高，但TAP组差异无统计学意义(P＞0.05)，AFP组差异有统计学意义(P＜0.05)；相较于手术治疗前，肝癌组术后1个月的TAP水平更低(157.2±100.3vs91.7±64.3)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
5、根据肝癌组患者手术治疗后1个月的TAP水平，将其分为部分缓解(不存在明显凝聚物)、疾病稳定(凝聚物较小)和疾病进展(凝聚物较大)。通过开展Kaplan-Meier生存分析可知，患者机体的TAP水平和无复发生存期存在着明显的相关性，依靠患者术后1个月的TAP水平作为评估指标，相较于疾病稳定和疾病进展组的肝癌患者，部分缓解组患者的无复发生存时间明显更长(25.4mvs10.7m)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
【结论】
1、TAP作为新的肿瘤标志物，在肝癌诊断中发挥良好作用，与AFP相比具有较高的灵敏度(71%vs68%)，与AFP联合检测可以提高肝癌患者的检出率(0.77vs0.75)，且联合检测具有更高的特异度(97%)及阳性预测值(96%)；
2、与AFP相比，末梢血TAP值不易受手术、炎症及肝细胞再生等因素的影响，TAP检测可能成为肝癌患者术后评估疗效的更早更加可靠的检测指标，结果还显示患者术后末梢血TAP值可以作为肝癌患者术后复发及转移的预测指标。
肿瘤异常糖链糖蛋白(TAP )是由前苏联科学院院士乌克兰科学院院士kostyantyantin.A.Calakhin教授发现的一种组合肿瘤标志物检测技术，是恶性肿瘤生成及新陈代谢过程钟产生的异常糖蛋白-钙组蛋白复合物，主要原理是各种致癌因素作用于机体健康细胞的DNA，从内在或者外在的因子中分离出一种糖链结构异常的糖蛋白与钙组蛋白复合物，较多的在外周血中存在，并在外周血液中检测到，目前在头颈部肿瘤、消化道肿瘤、胸腔肿瘤、生殖泌尿系肿瘤、血液系统肿瘤及神经系统肿瘤中广泛应用，但尚无公认的标准。本研究拟检测末梢血TAP在肝细胞癌患者中的表达情况，观察其在肝癌诊断中的临床意义，并分析末梢血TAP与肝癌患者临床病理特征之间关联的相关因素。同时对于中晚期肝癌患者，已失去手术切除及局部治愈性微创治疗的良好时机，仅有10~15%可以进行外科手术切除，而肝内转移的发生率在首次进行手术切除的患者中高达50%，哪怕进行了手术切除，其复发率仍很高[10-11]。对于已经失去治愈性手术机会的患者来说，TACE手术可有效延长肝癌患者的生存期，但整体生存期仍较短[12]。本研究也通过对肝癌患者术前及术后(手术治疗方式包括超声引导下肝癌微波固化治疗术PMCT，外科切除术，肝癌射频消融术，肝动脉栓塞化疗术TACE及DEB-TACE等)的TAP值进行收集分析，了解TAP值在术后的疗效评估价值，并进一步探讨其在肝癌患者术后复发及转移的预测价值。
【目的】
1、通过检测末梢血TAP在PHC患者、肝硬化患者的含量了解TAP在肝癌患者中的表达水平及其临床特征及意义；
2、对进行手术治疗的PHC组患者进行随访，分析PHC患者手术前后的异常糖链蛋白(TAP)的水平变化，并与AFP进行比较探讨其在肝癌术后疗效评估中的价值，且术后TAP与PHC患者无复发生存期相关性的研究进行了初步的探讨。
【方法】
1、选取2015年1月至2016年9月我院收治的新诊断为肝癌患者，经过以下排除标准后筛入79例为肝癌组(PHC组)，排除标准：未获得基线AFP及TAP值；伴随有肝外的恶性肿瘤；既往有恶性肿瘤治疗史；非肝病所致的AFP升高；特殊类型的AFP正常的肝癌，如纤维板层样肝癌等。其中73例患者为男性，6例患者为女性，所纳入患者年龄范围为41~78岁，其中平均年龄为(62.3±10.9)岁，其中HBV相关肝癌患者50例，HCV相关肝癌患者15例，酒精性肝硬化所致肝癌患者9例，患者肝癌诊断均经B超、CT和病理组织学检查确诊(初诊断均符合2011版原发性肝癌诊疗指南，后期数据分析根据2017版原发性肝癌诊疗指南)，其中Ia-IIb期肝癌患者为56例，均接受手术治疗(手术治疗方式包括超声引导下肝癌微波固化治疗术PMCT，外科切除术，肝癌射频消融术，肝动脉栓塞化疗术TACE及DEB-TACE等)，对患者接受手术治疗前、手术治疗后1周以及手术治疗后1个月的指端末梢血TAP进行收集分析。
同期收治的肝硬化组患者77例，其中HBV相关肝硬化患者41例，HCV相关肝硬化患者17例，酒精性肝硬化患者13例，男性患者为59例，女性患者为18例，所纳入患者年龄范围为33~76岁，平均(55.6±10.0)岁。
2、TAP检测需采集患者空腹末梢静脉血2ml，制作成厚薄均匀的血涂片，血涂片面积应大于载玻片三分之二；
3、在恒温恒湿的(温度18-25℃，相对湿度45-60%)工作环境中放置10分钟；
4、取TAP检测试剂液在血涂片上垂直方向均匀滴加3滴(每滴约50ul)，形成3个斑点(10-12mm/Φ)，平放静置待干约2小时，待其自然干燥，直至有圆形的“斑点”形成，则可应用TAP集成阅片仪对标本进行检测，对特异形态的凝聚物进行寻找；
5、平场消色差物镜(4倍)作为肿瘤异常蛋白检测系统图像分析仪主要的检测工具，有三个斑点显示在显示器上，进行扫描观察异常形态的凝聚物，必要时可联合高倍镜进行进一步分析。若TAP正常，则不存在明显的凝聚物，凝聚物面积保持为0~121μm2；若TAP异常，则存在明显的凝聚物，凝聚物面积保持为121μm2以上，若凝聚物面积在225μm2及以上，则提示存在面积较大的凝聚物。收集入组患者的TAP检测结果录进行分析。
6、AFP检测方法为：检测所应用的仪器为PhilipsSHK5500型全自动电化学发光免疫分析仪，所应用的检测试剂为甲胎蛋白测定试剂盒(Immulite 2000 AFP)，检测方法按照试剂盒说明书进行操作。
7、统计学软件为SPSS17.0。x±s表示计量数据，两组间数据行t检验，多组间数据行F检验；[n，(%)]表示计数资料，行X2检验；P＜0.05表示有统计学意义。多因素分析采用Logistic回归分析，生存分析应用Kaplan-Meier的Log-rank检验，应用GraphPadPraism5.0开展数据处理。
【结果】
1、两组基线值比较
在纳入的156例受试者中(肝癌患者79例及肝硬化患者77例)，病因为慢性HBV感染患者91例，HCV感染患者32例，酒精性肝病22例，病因不明患者7例，在肝癌组中慢性乙型肝炎病毒感染为首要致病因素，丙型肝炎病毒感染次之，酒精性肝炎所致肝癌患者比例在第三名，肝硬化组患者病因分析与肝癌组患者呈现相同趋势，但酒精所致肝硬化较肝癌组更常见，但两组无显著统计学差异，肝硬化组中免疫相关性肝硬化患者有3例，免疫相关性肝病为基础发生肝癌的患者仅1例，肝癌组患者较肝硬化组男性患者发病率更高(92.4%vs76.6%)。
2、同时根据两组患者纳入的TAP及AFP数据进行初步分析，比较两组患者的AFP及TAP基线值，结果显示，相较于肝硬化组，肝癌组患者的TAP和AFP水平明显更高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
3、对肝癌进行诊断时，两组患者进行AFP及TAP单独检测及联合检测，单独指标进行检测时，TAP灵敏度更高(71%vs68%)，但AFP单一检测结果在特异度及AUC均较TAP组更高，但差异不具有统计学意义(P＞0.05)；但与单独检测相比较，AFPandTAP组特异度及AUC(0.77)均高于其他三组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
4、相较于手术治疗前，肝癌组术后1周TAP及AFP均有不同程度升高，但TAP组差异无统计学意义(P＞0.05)，AFP组差异有统计学意义(P＜0.05)；相较于手术治疗前，肝癌组术后1个月的TAP水平更低(157.2±100.3vs91.7±64.3)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
5、根据肝癌组患者手术治疗后1个月的TAP水平，将其分为部分缓解(不存在明显凝聚物)、疾病稳定(凝聚物较小)和疾病进展(凝聚物较大)。通过开展Kaplan-Meier生存分析可知，患者机体的TAP水平和无复发生存期存在着明显的相关性，依靠患者术后1个月的TAP水平作为评估指标，相较于疾病稳定和疾病进展组的肝癌患者，部分缓解组患者的无复发生存时间明显更长(25.4mvs10.7m)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
【结论】
1、TAP作为新的肿瘤标志物，在肝癌诊断中发挥良好作用，与AFP相比具有较高的灵敏度(71%vs68%)，与AFP联合检测可以提高肝癌患者的检出率(0.77vs0.75)，且联合检测具有更高的特异度(97%)及阳性预测值(96%)；
2、与AFP相比，末梢血TAP值不易受手术、炎症及肝细胞再生等因素的影响，TAP检测可能成为肝癌患者术后评估疗效的更早更加可靠的检测指标，结果还显示患者术后末梢血TAP值可以作为肝癌患者术后复发及转移的预测指标。