免疫球蛋白的制备及对小白鼠免疫功能的影响

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以新鲜猪血浆为原料,采用饱和硫酸铵分步盐析法制备免疫球蛋白产品,并研究其对小白鼠免疫功能的影响。试验一:以IgG的含量为考查指标,比较辛酸法和饱和硫酸铵盐析法的沉淀效果。结果表明,饱和硫酸铵盐析法的沉淀效果优于辛酸法。试验二:以IgG的含量为考查指标,采用单因素试验和正交试验优化免疫球蛋白的提取条件。单因素试验结果表明:①提取温度为30℃时,IgG的含量最高,达81.75%。②静置时间为45min时,IgG的含量最高,达87.43%。③pH值为7.0时,IgG的含量最高,达81.47%。正交试验结果表明:最佳工艺参数为温度20℃,静置时间45min,pH值7.0,此条件下IgG的含量为88.08%。试验三:采用环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cy)建立免疫抑制模型,研究自制IgG对小白鼠免疫功能的影响,旨在探讨自制的IgG能否增强小白鼠的免疫力。选用健康的SPF级昆明种小鼠100只,雌雄各半,体重18±2g,分为10个处理组,每组10只:①正常空白组;②齐墩果酸组;③低剂量IgG组;④中剂量IgG组;⑤高剂量IgG组;⑥空白组+Cy;⑦齐墩果酸组+Cy;⑧低剂量IgG组+Cy;⑨中剂量IgG组+Cy;⑩高剂量IgG组+Cy。③⑧、④⑨、⑤⑩组灌胃剂量分别为45、90、180mg/kgBW,②⑦组灌胃剂量为36mg/kgBW,①⑥组用等体积的生理盐水灌胃。在试验第3天和第6天分别给各模型组小鼠腹腔注射Cy 75mg/kgBW。于末次给药后次日,称重,眼眶采血并分离血清,颈动脉放血处死小鼠,取脾脏、胸腺称重,分别计算脾脏指数、胸腺指数;测定小鼠血清中IgG,白蛋白,球蛋白,总蛋白和免疫球蛋白的含量。结果表明:(1)试验动物经Cy处理后,脾脏和胸腺均明显萎缩,均小于正常空白组,三种剂量的IgG对此有显著的保护作用(P<0.05),且呈现一定的剂量-效应关系,综合考虑生产成本以低剂量为宜。(2)与正常空白组相比,灌胃IgG后对Cy所致动物迟发型超敏反应(Delayed type of hypersensitivity,DTH)低下有显著的对抗作用(P<0.05),但与模型组相比差异不显著(P>0.05)。(3)与正常空白组相比,灌胃提取的IgG能对抗由Cy所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的降低,但差异不显著(P>0.05),与模型空白组相比,中剂量IgG组能显著对抗由Cy所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率的降低(P<0.05),但对吞噬指数差异不显著(P>0.05),均未呈现剂量-效应关系。(4)灌胃IgG后能显著增加小鼠血清中IgG的含量,与正常空白组相比达显著水平(P<0.05),尤其以高剂量效果最明显;与模型空白组相比,灌胃IgG后小鼠血清中的IgG含量增加,但差异不显著(P>0.05),且呈现剂量-效应关系,说明提取的IgG在达到一定剂量时可以不同程度的增强小白鼠体液免疫能力,并可显著对抗由Cy引起的小鼠血清中IgG含量的降低(P<0.05)。(5)与正常空白组相比,灌胃IgG能显著提高小鼠血清中免疫球蛋白的含量(P<0.05),但未呈现剂量-效应关系;与模型空白组相比,灌胃IgG后小鼠血清中的IgG含量增加,但差异不显著(P>0.05),也未呈现剂量-效应关系。(6)与正常空白组相比,灌胃IgG后小鼠血清中球蛋白的含量显著升高(P<0.05),但未呈现剂量-效应关系,与模型空白组相比差异不显著(P>0.05)。试验四:选用健康的SPF级昆明种小鼠80只,雌雄各半,体重18±2g,分为2个处理组,每组40只:①空白对照组;②自制IgG试验组。于试验第1天给②组小白鼠一次性灌胃10g/kgBW自制IgG后,连续观察15天,每周空腹称重一次,并记录小白鼠的死亡情况。结果表明:试验组小白鼠的体增重显著高于对照组,试验期间小鼠无一死亡,证明提取的IgG是无毒的。
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