目的（1）探究上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）在皮肤创面修复过程中的作用。（2）探究β₂-肾上腺素受体（β₂-adrenergic receptor,β₂-AR）信号通路在皮肤创面愈合过程中的作用,为创面愈合的分子机制研究提供新的思路。（3）探究骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）在促进皮肤创面愈合过程中的可能机制,为间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）的临床应用提供坚实的理论基础。（4）建立小鼠创面模型进行体内实验,验证BMSCs促进皮肤创面愈合的作用及相关机制。方法（1）取人皮肤正常及创面组织,通过免疫荧光染色检测CK19、CK14、钙黏蛋白（E-cadherin）以及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在两种组织中表达量与分布的差异。（2）选用人角质形成细胞（human epidermal keratinocyte,HEK）和人永生化表皮细胞（human immortalized keratinocyte,HaCaT）细胞两种表皮细胞系进行体外细胞实验。使用β₂-AR激动剂异丙肾上腺素（isoproterenol）、β₂-AR选择性抑制剂ICI-118,551以及应用基因沉默技术在体外激活或抑制β₂-AR的表达水平,通过逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）等方法从基因及蛋白水平检测EMT相关转录因子在表皮角质形成细胞中的表达,探究β₂-AR信号通路在角质形成细胞发生EMT样改变过程中的作用;同时,通过细胞划痕实验探究β₂-AR信号通路在角质形成细胞迁移中的作用。（3）收集骨髓间充质干细胞培养上清液（bone marrow-derived mesenchymal stem cell conditioned media,BMSC-CM）作用于HEK和HaCaT细胞。MTT法检测BMSC-CM对角质形成细胞增殖能力的影响;使用isoproterenol、ICI-118,551以及应用基因沉默技术在体外激活或抑制β₂-AR的表达水平,通过RT-qPCR、Western blot法从基因及蛋白水平探究BMSC诱导角质形成细胞发生EMT样改变的可能机制及其在皮肤创伤修复过程中的作用。（4）建立C57BL/6J小鼠创伤模型,分别给予BMSC和生理盐水对照治疗。观察并统计各处理组创面的愈合情况;取创伤后第3、6、9天皮肤创缘组织,通过Western blot法检测β₂-AR、E-cadherin及α-SMA的表达情况,探究BMSC促进创面愈合的相关机制;同时对创缘组织进行免疫荧光染色,观察EMT相关蛋白的分布情况。结果（1）人皮肤正常及创面组织表皮层角质形成细胞增殖能力存在明显差异,相较于正常组织,创面组织中CK19、CK14阳性细胞分布广泛,且创面组织表皮层角质形成细胞同时表达上皮化标志物E-cadherin以及间质化标志物α-SMA,提示EMT样改变在创面修复中扮演着重要角色。（2）RT-qPCR与Western blot结果显示isoproterenol可通过激活β₂-AR在HEK及HaCaT细胞中的表达,从而使其间质化标志物α-SMA、Snail在基因及蛋白水平表达增高,而上皮化标志物E-cadherin表达降低;同时isoproterenol还可以在体外促进角质形成细胞的迁移能力。上述isoproterenol作用可被β₂-AR选择性抑制剂ICI-118,551逆转;HEK及HaCaT细胞β₂-AR基因沉默后,isoproterenol对其EMT相关蛋白表达水平的影响减弱。结果表明β₂-AR信号通路参与体外调控角质形成细胞发生EMT样改变,这对皮肤创面愈合过程中的再上皮化具有重要意义。（3）MTT法及细胞划痕实验结果显示BMSC-CM可于体外促进HEK和HaCaT细胞的增殖及迁移能力;经BMSC-CM处理后的角质形成细胞,β₂-AR在基因及蛋白水平表达明显上调,随之上皮化标志物E-cadherin表达下调,而间质化标志物ɑ-SMA和Snail表达水平增加;β₂-AR选择性抑制剂ICI-118,551可以逆转BMSC-CM对E-cadherin、ɑ-SMA及Snail表达水平的影响;HEK和HaCaT细胞β₂-AR基因沉默后,BMSC-CM对其EMT相关蛋白表达水平的影响减弱。进一步研究结果显示,使用β₂-AR下游效应分子PKA抑制剂H89处理角质形成细胞,其间质化标志物ɑ-SMA在蛋白水平表达显著减少,BMSC-CM可在一定程度上减轻H89的抑制作用。由此可知,BMSC通过旁分泌作用激活角质形成细胞的β₂-AR,诱导细胞发生EMT样改变。（4）小鼠创伤模型实验证实BMSC加速皮肤创面的愈合;Western blot结果显示,创伤后第3、6、9天,BMSC治疗组与空白对照组比较,创缘组织表皮细胞β₂-AR表达增加,随之α-SMA表达上调,而E-cadherin表达下调;免疫荧光染色发现,创缘组织表皮靠近基底层的多层细胞CK14阳性,提示创伤愈合过程中表皮层细胞增殖活跃,并且BMSC治疗组小鼠创缘组织毛囊外根鞘上部存在α-SMA和E-cadherin双阳性表达细胞。综上可知,BMSC促进创面愈合与其诱导角质形成细胞发生EMT样改变有关。结论本研究对BMSC促进皮肤创面愈合的机制进行了初步探索,发现BMSC通过旁分泌作用激活创缘残余角质形成细胞β₂-AR,从而促进其EMT过程,加快细胞迁移至创口处,实现加速再上皮化与创面愈合的功能,为今后MSCs广泛应用于临床创面治疗提供了扎实的理论基础,并为后续从神经-内分泌角度探究创面愈合的分子机制提供了新的思路。