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目的通过在钛板表面建立金黄色葡萄球菌细菌生物膜模型,在激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)下观察细菌生物膜(BBF)的结构、中层及底层的活菌率;研究0.5%、0.25%浓度的聚维酮碘溶液对金黄色葡萄球菌BBF的体外杀菌效果。方法选取斜面保种的金黄色葡萄球菌(SA),接种于预先配制的胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)中,37℃(5%CO2)的恒温培养箱中培养16小时获得菌液,通过比浊仪将菌液浓度调成1.0×106 CFU/ml备用。将15枚清洁、钝化、消毒过的钛板随机分装至3个25cm2细胞培养瓶,每个细胞培养瓶内5枚钛板、1ml上述调配好的菌液、20ml TSB,置37℃(5%CO2)的恒温培养箱中培养24小时形成成熟BBF。从以上3个细胞培养瓶中随机取出10枚钛板在避光环境下由SYTO9/PI组成的染色剂染色20分钟,在CLSM下观察BBF的结构、活菌率,另外5枚在经过漩涡振荡器、超声降解、离心机离心处理后接种至血平板培养基做细菌培养。根据上述建模方法,在45枚钛板表面建立金黄色葡萄球菌BBF模型,取出后用PBS冲洗3次,将45枚钛板随机分为3组,每组15枚,其中两组分别置于0.5%和0.25%的聚维酮碘溶液中作用5分钟,通过由硫代硫酸钠、吐温80、卵磷脂组成的中和剂将钛板表面的碘残留去除,这两组中的每组其中10枚钛板通过上述染色方法染色20分钟后在CLSM下观察BBF的结构、活菌率的变化,另外5枚在经过漩涡振荡器、超声清洗、离心机离心处理后接种至血平板培养基做细菌培养。另外一组其中10枚钛板作为对照组,剩余5枚在经过漩涡振荡器、超声清洗、离心机离心、稀释处理后接种至血平板培养基做细菌培养。结果①BBF在CLSM下呈高度组织化的群体结构。BBF在CLSM下的图像由橙色或橘黄色荧光、绿色荧光、红色荧光、暗性区域组成。其中橙色或橘黄色荧光由活菌和死菌在同一位置叠加而成,绿色荧光代表活菌,红色荧光代表死菌。②CLSM下的BBF是团块状的多聚物。活菌大多被包裹在生物膜的中间,死菌大多在BBF同一层面的外围。③培养24小时后成熟BBF中层活菌率为(67.35±1.06)%,底层活菌率为(39.42±2.23)%。中层和底层的BBF活菌率具有明显的统计学意义(P<0.01)。④0.5%聚维酮碘溶液作用10分钟后的BBF的中层、底层活菌率分别为(66.65±1.37)%,(38.22±3.15)%。⑤0.25%维酮碘溶液作用10分钟后的BBF的中层、底层活菌率分别为(66.53±1.00)%,(39.13±2.41)%。⑥0.5%聚维酮碘溶液作用10分钟后的BBF的中层、底层活菌率与0.25%聚维酮碘溶液作用10分钟后的BBF的中层、底层活菌率和空白对照组相比差异都无统计学意义(P>0.05)。⑦模型组、0.5%和.25%聚维酮碘组做细菌培养的血平板培养基内均可见菌落形成,经鉴定均为SA。结论①本实验所采用的建立金黄色葡萄球菌BBF模型方法相对简单、可重复性强,可用于研究同种细菌不同异物表面细菌生物膜的形成能力。②在BBF内,中层活菌率较底层活菌率高,死菌大多出现在活菌同一层面的外围。③0.5%、0.25%浓度的聚维酮碘溶液对钛板表面金黄色葡萄球菌BBF无明显杀菌效果。