猝灭型RNA荧光探针的构建及在铂类药物等浓度测定中的应用

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在临床实践中,由于机体的个体差异,同种剂量的相同药物治疗疗效差异很大,因此监测血液中的药物浓度尤为重要,而测定血药浓度的方法存在着前处理要求高、耗费时间长等不足之处。核酸适配体是一段有特异性亲和力的核酸序列,通常利用体外筛选技术得到。本文采用一种新型的RNA适配体-荧光基团复合物作为猝灭型RNA荧光探针,该方法简单快捷、灵敏度高,有望直接应用于细胞水平药物浓度的实时监测。本论文主要分为三个部分:首先,前言部分主要介绍了血药浓度检测方法和存在的缺点,以及目前报道较多的三种RNA适配体Spinach,Broccoli,Corn的发展应用。其次,应用RNA猝灭型荧光探针检测具有平面结构的铂类药物浓度。通过对已有的几种RNA适配体-荧光基团复合物的荧光增幅对比,选出增幅最强的Broccoli和DFHBI-1T组合,然后从RNA折叠和小分子孵育两个方向入手对Broccoli-DFHBI-1T产生荧光的条件进行优化。通过利用RNA适配体-荧光基团复合物Broccoli-DFHBI-1T,本文构建出一种猝灭型RNA荧光探针Bro-1T,用于检测具有共轭结构的铂类药物。其原理是:具有平面结构的铂类药物可插入到G-四联体中,与荧光分子DFHBI-1T竞争,导致荧光猝灭。体系荧光强度随药物浓度的增加而降低,使探针Bro-1T可以应用于铂类药物浓度范围的可视化分析,并有望进行细胞水平药物浓度的成像与监测。本文用此方法检测了Trans-Pt-3-TPPA 及 Cis-3-Pt-TPPA 等铂药,检测限是 42.6 nM 和 10.8 nM。此外,本文还利用Bro-1T猝灭型荧光探针分析表小檗碱和白屈菜红碱两种中药药物的浓度范围,检测限分别为0.16 nM和3.75 nM,可以达到非常灵敏的检测水平。
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