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本研究旨在构建两种驱动神经细胞特异性表达DHCR24(3β-Hydroxysteroid-△24reductase,24-脱氢胆固醇还原酶)的腺病毒载体,以探讨DHCR24的抗氧化和清除Aβ作用与神经退行性病阿尔茨海默症(Alzheimer Disease,AD)的相关性。从人及大鼠源基因组DNA上分别PCR钓取出500bp左右的SYN1启动子(SYN1),以分别构建人源SYN1启动子驱动DHCR24神经元特异性表达的腺病毒及鼠源SYN1启动子驱动的DHCR24神经元特异性表达的腺病毒。两者的构建方法基本一致。将PCR产物经TA克隆、测序后,挑取阳性克隆子,酶切后,将酶切产物SYNl启动子序列插入到重组质粒pcDNA3.1A-DHCR24-myc的DHCR24 cDNA序列上游;之后用限制性内切酶切下SYN1-DHCR24-myc片段,并连接到穿梭质粒pShuttle中。然后将SYN1-DHCR24-myc片段通过同源组换插入到复制缺陷型AdenoV病毒骨架DNA中。以线性化Adeno-SYN1-DHCR24 DNA通过脂质体转染293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-SYN1-DHCR24,经鉴定后进行腺病毒的扩增和提取。所得重组腺病毒Ad-SYN1-DHCR24的病毒滴度为1x109pfu/μL和3.5x109pfu/μL。用Ad-SYN1-DHCR24分别感染293细胞、小鼠神经母细胞瘤细胞株N2A、以及小鼠胰腺癌细胞株MIN6细胞以确定DHCR24的过表达及表达的神经细胞特异性。通过Western blot技术,采用标签抗体Anti-myc作为一抗,鉴定DHCR24蛋白表达情况。Western bolt结果显示,在293细胞和N2A神经细胞,在相对分子量约56k处均出现特异性条带,而MIN6未出现明显特异性条带。综上,我们成功地构建了两种神经特异性表达DHCR24的重组腺病毒载体,为进一步研究DHCR24的功能及其与神经退行性疾病的相关性奠定了基础。