论文部分内容阅读
我国是世界荔枝原产地，其栽培史悠久，生态环境多样，拥有世界上最富有的荔枝种质资源和适应不同环境条件的荔枝品种和类型，包括单性结实、胚败育、特大型果、特晚熟、纯甜风味和果皮鲜红等。目前，大多荔枝优稀种质未能商品化栽培，主要原因是荔枝为多年生的高大乔木，换代不易，其较长的童期致使荔枝采用常规杂交培育新品种不易。
尽管荔枝种质资源类型丰富多样，但在品种选育过程中仍存在着主栽品种的遗传基础狭窄和础单一等缺陷，加之有些地方品种本身并无科学名，导致品种资源不仅类型多而且名称乱，同名异物或同物异名现象严重，给种质资源的保存、评价、育种利用和现代化生产与贸易带来极大不便。此外，荔枝现存资源保存方式单一，几乎各地大多仅采用建立资源圃进行田间种植保存方式，而且资源的重复保存现象较严重，其保护力度也远远不够，荔枝的遗传多样性遭到严重的破坏，此外，荔枝是多年生木本植物，树体大，作为资源保存，占地面积大且近年来遗传资源数量的增加也给种质资源的保存、研究与利用带来了很大的困难。
为解决以上问题，本研究利用已获得的荔枝果皮cDNA文库EST序列，采用SSRIT和Repeatmaster软件筛选SSR位点和采用Primer primer5.0软件设计SSR引物，对广东省农科院果树研究所国家荔枝种质资源圃的96份材料，开展EST-SSR分子标记筛选和技术应用，并对荔枝种质资源遗传多样性、种质间的亲缘关系和新种质鉴定以及核心种质及其分子指纹图谱构建进行了深入的分析，获得了如下结果：
(1)对测序所得的3391条荔枝EST序列，通过SSRIT在线检索得到305条含有SSR，占整个EST的8.99％。利用SSR-ESTs序列共设计100对EST-SSR引物，其中62对在荔枝上有扩增产物，50对有多态性，且有一定的通用性。
(2)对96个荔枝种质的基因组DNA进行PCR扩增，筛选出多态性较好的EST-SSR分子标记30个，在此基础上，对荔枝的主栽品种和特殊种质进行鉴别，结果表明，该30个EST-SSR分子标记在不同品种间可产生较清晰可辨的多态性差异，产生的特异谱带和多态性类型差异可作为品种和种质资源鉴别和鉴定的分子指纹。
(3)采用UPGMA聚类分析将96份荔枝种质资源分成了8大类群，该8大类群基本与其生态类型和植物学性状特征相符。
(4)对新选育的品种红灯笼从特征谱带和分子指纹上进行了鉴定，将红灯笼确认为荔枝的一个新种质。
(5)应用EST-SSR标记来构建荔枝的核心种质，且从分子指纹上进行了确认，结果表明，构建的29份核心种质其多态位点百分率保持了原群体的100％，与原96份种质群体没有显著性差异，能够很好的代表原种质群体的遗传多样性。