坛紫菜新品系纯系主要经济性状的研究及DNA序列分析

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本文对坛紫菜品系间杂交和选育获得的四个品系[优质新品系(Q-1)、速长新品系(Z-17)、耐高温新品系(Z-26)以及薄叶新品系(Z-61)]进行研究。利用植物细胞的全能性,通过酶解叶状体、单克隆培养、无性繁殖系培育以及大量筛选,分别获得各品系F1、F2、F3、F4代叶状体,针对各品系的特点,分别进行培育、筛选以及经济性状的研究,保持各品系的优良经济性状稳定遗传,从而获得性状比较稳定、品系性状特点比较突出的坛紫菜纯系,为进一步推广生产,提高社会经济效益奠定一个良好的基础。同时,对各实验品系的ITS-5.8S rDNA、rbcS-ISR rDNA进行了PCR扩增、克隆及测序,对测序结果进行了多序列比对分析并比较两种实验方法所得结果的异同性,揭示了各实验品系的分子背景差异;此外,通过和GenBank数据库中已经公布的其它紫菜rDNA序列的比较,为分析坛紫菜的系统进化及种质鉴定探索一条新途径。主要结果如下:1.纯系的建立:用海螺酶酶解挑选出的具有优良性状的坛紫菜叶状体制备游离的营养细胞,在显微镜下观察到部分细胞有2种发育形成丝状体的途径:单细胞直接形成丝状体;单细胞先形成细胞团,细胞团再发育形成丝状体。利用单细胞发育成丝状体的途径,将培育出的丝状体进行促熟、促放后可形成小叶片(F2);在获得的大量叶片中进行选育,对于突出经济性状稳定的叶片进行酶解,随后通过单克隆获得丝状体,即可获得F3、F4叶状体,通过不断的选育及经济性状的比较即获得经济性状可稳定遗传的纯系。2.优质型坛紫菜(Q-1)的经济性状:不同子代叶状体平均日增长量及平均日增重率显著的高于对照组。F4叶状体的藻胆蛋白及叶绿素a的含量最高,分别达到(120.06±1.84)mg/g、(10.39±0.08)mg/g,藻胆蛋白及叶绿素a的含量在4个子代之间成正相关变化;粗蛋白含量最高可达(44.47±0.53)g/100g,比对照组高35.6%;总氨基酸总量为38.53g/100g,显著的高出对照组33.5%;四种主要的呈味氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸)总量为2.44g/100g,为对照组的1.40倍。以上主要经济性状特别是优质的突出性状可以较稳定的遗传。3.速长型坛紫菜(Z-17)的经济性状:4个子代叶状体全部为雌体、不易成熟且具有良好的生长特性。初始长度为3-4cm的(Z-17)4个子代叶状体,经过16-20d培养,平均日增长量分别可达对照组的5-6倍;经过1-5d培养,平均日增重率分别是对照组的2倍左右,具有显著的生长优势。F4叶状体的藻胆蛋白含量是(123.35±3.69)mg/g,为对照的1.81倍;叶绿素a的含量为(8.87±0.16)mg/g,比对照组高34.4%;粗蛋白含量为(40.44±0.27)g/100g,比对照组高23.3%;总氨基酸总量为31.39g/100g,丙氨酸的含量为1.09g/100g,为对照组的2.22倍。以上主要经济性状特别是速长的突出性状可以较稳定的遗传。4.耐高温型坛紫菜(Z-26)的经济性状:不同子代叶状体在正常培养条件下较对照组有较强的生长优势。F4叶状体在30℃下培养8d时,部分藻体出现了较多的针尖状白点;而对照组叶状体在29℃、30℃下培养的第2d开始成熟,第3d开始腐烂,第5d几乎完全腐烂以至无法测量。这说明(Z-26)品系是比较耐高温的,对高温有较强的忍受力。F4叶状体的藻胆蛋白含量是(145.64±1.71)mg/g,为对照的2.14倍;叶绿素a的含量为(10.51±0.89)mg/g,比对照组高59.2%;粗蛋白含量为(36.94±0.06)g/100g。丙氨酸、谷氨酸含量的总和约占游离氨基酸总量的70%左右,为对照组的1.8倍左右。以上主要经济性状特别是耐高温的突出性状可以较稳定的遗传。5.薄叶型坛紫菜(Z-61)的经济性状:不同子代叶状体在正常培养条件下较对照组有较强的生长优势。4个不同子代中,F4第一次剪收时藻体厚度为22.97μm,为对照组的56%,胶质膜较薄。随着剪收次数的增加,培养时间的延长,藻体细胞逐渐老化,使得藻体变厚。第二次剪收时藻体厚度为31.72μm,为对照组的70%,胶质膜的厚度是第一次剪收时的2.21倍。F4叶状体未剪收及第一次剪收后色素蛋白、粗蛋白以及氨基酸均高于对照组。以上主要经济性状特别是薄叶的突出性状可以较稳定的遗传。6.对实验品系坛紫菜的ITS-5.8S rDNA区进行的多序列比对分析表明5.8S区较为保守,可通过序列测定来进行物种的分类;而ITS区的碱基序列变异程度较高,可通过ITS区的序列变异来进行种质鉴定,同时判断各品系紫菜之间的系统进化关系。这种序列保守区和高变区交替出现的方式为紫菜的种质鉴定和遗传进化分析提供了很大的方便。同时,对实验品系坛紫菜的rbcS-ISR进行了克隆与序列分析,实验品系坛紫菜的基因序列完全相同,没有碱基差别,将本实验的1条紫菜序列与Genbank数据库收录的6条紫菜Rubisco序列一起做系统分析,结果表明不同种的紫菜分别归到了各自的类群中。这就说明紫菜rbcS-ISR基因间隔区序列的同源性较高,在进化上比ITS序列更为保守,只可用于种以上水平的系统分析,不适于属以下关系的鉴别。
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