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家蚕杆状病毒(BmNPV)中的lef-9与lef-4,lef-8和47共同编码的蛋白联合体的亚基可以在体外启动polh启动子转录。但是,其在基因转录中的调控作用和病毒复制繁殖中所起的作用还未见报道。在本研究中,我们借助Red重组技术成功构建了lef-9基因缺失型病毒lef-9-KO-Bacmid,并利用Bac-to-Bac系统构建了lef-9基因补回型病毒lef-9-Re-Bacmid。将构建好的病毒基因组DNA转染BmN细胞。研究发现,lef-9缺失型病毒不能生成有感染活性的病毒粒子,而补回型病毒能够恢复病毒的感染活性,表明lef-9基因是病毒感染形成有感染活性BV(Buddedvirus)的必需基因。为进一步了解lef-9缺失对BmNPV基因组复制及基因转录表达的影响,我们以具有代表性的早晚期基因和极晚期基因为研究对象,利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究了lef-9对病毒复制和基因转录调控的作用机制。qPCR研究结果表明,lef-9缺失后,病毒基因组的复制未受到明显影响(P>0.05);而病毒早期基因ie-1和lef-3,晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平相比较修复型与野生型病毒而言均有显著降低(P<0.05);Westernblotting结果也显示lef-9基因缺失型病毒基本不表达蛋白LEF-3、VP39和P10(P<0.05)。同时,我们利用透射电镜技术对lef-9-KO-Bacmid、lef-9-Re-Bacmid和wtBacmid感染的家蚕BmN细胞进行观察,结果发现lef-9-KO-Bacmid感染的细胞并没有发现形成成熟的病毒粒子;而lef-9-Re-Bacmid和wtBacmid感染的细胞中均出现了明显的感染症状,装配形成了大量的病毒粒子。以上研究结果表明lef-9不是BmNPV病毒基因组复制的必需基因,但对病毒各个时期的基因转录及表达均有显著影响。电镜分析结果也进一步证实了上述结果。