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大肠杆菌属Nissle 1917(EcN)是一种非致病性大肠杆菌,是非乳酸益生菌中研究最多的益生菌,血清型为O6:K5:H1,具有独特的基因组、半粗O6-脂多糖(LPS)表型、K5型荚膜、3种不同的菌毛(F1A、F1C和卷曲菌毛)。EcN具有小菌素和铁摄取系统等特殊适应性因子,能长期稳定定植于肠道,与肠上皮细胞相互作用,因此被广泛用于预防传染性腹泻、炎性肠疾病和发挥免疫调节生物学功能。GPR119是G蛋白偶联受体,在人体中由GPR119基因编码,在人类的胰腺和胃肠道表达。已有研究显示该受体的活化能够促进大鼠的食物摄入减少,从而使其体重减少。GPR119也已被证明可调节肠促胰岛素和胰岛素分泌。本论文工作主要是探讨和筛选重组工程菌Nissle1917表达产物对GPR119激活作用。研究结果主要分为四部分:1.利用生物信息学以及基因工程技术构建表达与人体天然内源性GPR119激动剂类似物。我们通过BLAST寻找在DNA水平和蛋白水平寻找与已经报道的能够激活GPR119激活剂类似物最相近的10个基因,在大肠杆菌中进行了密码子优化,通过DNA重组、基因突变等技术构建在相应载体上。2.筛选细胞株的构建。我们构建表达GPR119和cAMP(环磷酸腺苷)的细胞反应株,通过已知的天然激活剂油酰乙醇胺(OEA)筛选合适的表达条件,通过以最适合的条件构建稳定的细胞株。3.筛选能够激活GPR119的表达产物。大肠杆菌Nissle1917的表达产物粗提物通过进行荧光素酶实验检测和cAMP试剂盒检测,最后筛选得到两个能够激活GPR119的基因。4.口服葡萄糖耐受度测试。C57BL/6小鼠给菌定植一周后,进行葡萄糖耐受测试,结果显示在细胞水平筛选到得两个菌种能够增加小鼠对葡萄糖的调节能力,这为后期小鼠实验的进行鉴定了基础,也可能为肥胖症提供了一种的新的治疗方法。