普鲁兰多糖是一种生物高分子材料,因其无色无毒且生物安全等特性,被广泛应用于医药食品等领域。本文对普鲁兰多糖发酵工艺和中试生产进行了研究,主要研究内容和结果如下:1、构建了一套通过高效液相检测普鲁兰多糖分子量的方法:流动相为0.05 M硫酸钠,进样量20uL,流速为0.5 mL/min,柱温为25℃,检测器温度30℃。2、对种子培养基成分以及培养条件进行了优化,优化后培养基成分为:蔗糖80 g/L,酵母浸粉 4.28 g/L,(NH4)2SO4 1 g/L,K2HPO4 2.78 g/L,MgSO4·7H2O 0.8 g/L,NaCl 2.5 g/L,FeSO4·7H2O 0.03 g/L。培养条件为:初始pH 6.5,32℃,摇床转速190 r/min。3、研究发现高温(32℃)适合出芽短梗霉生长,低温(28℃)适合多糖产生;恒定通风4 L/min时,转速500r/min菌体生长较快,400r/min利于普鲁兰多糖的产生;在菌体处于稳定期调控pH稳定在5.0多糖产生较快。确定了 5L(装液量3.5L)机械搅拌罐的发酵条件为:初始pH6.0,恒通风4L/min,菌体处于稳定期前,搅拌转速为500 r/min,温度32℃,pH不进行调控;菌体处于稳定期后,调整搅拌转速为400 r/min,温度为28℃,控制pH恒定在5.0。4、在多糖大量产生时,观察菌体形态,发现:温度在一定范围内对出芽短梗霉形态影响不大,均为酵母状;不同通风和搅拌条件下,出芽短梗霉形态略有差异,出现了膨胀孢子,pH对细胞形态影响较大,出现厚垣孢子,菌丝体。5、普鲁兰多糖分子量随着发酵时间不断变化,pH对分子量影响显著,pH越低,普鲁兰多糖分子量越高。6、根据已有经验进行5m3中试实验,各批次产品均符合国家标准,于2014年初获得普鲁兰多糖生产许可证。