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白细胞介素(IL-24)又称黑色素瘤分化相关基因-7(melanom.differentiationassociate.gene-7,MDA-7),是一种细胞因子且属于白介素-10家族。最初是在人黑色素瘤细胞中发现的,该基因在诱导分化的黑色素瘤细胞中高表达,并能促进黑色素瘤细胞分化。该基因主要表达于胸腺、脾、外周血单核细胞等免疫组织和分化的黑色素细胞,其他组织细胞可诱导表达。该基因具有抗肿瘤作用,已引起广泛关注。
为了研究IL-24的功能,将该基因克隆到融合表达载体pET-28a(+)相应的酶切位点上,得到融合蛋白表达质粒pET-28a-IL-24,经PCR、酶切鉴定以及测序证明重组是正确的。将该重组子转化感受态细胞E.col.BL21(DE3),经终浓度为1mM的IPTG诱导后,在28kDa处有一特异性蛋白条带,与预期值相符。经超声波裂解菌体分离包涵体并离心、洗涤;对进行包涵体溶解后采用亲和层析纯化纯化融合蛋白6xHis-IL-24。以该重组蛋白为抗原免疫雄性新西兰大白兔制备多克隆抗体,效价大于1:51200;Wester.blot实验呈阳性,为进一步研究该蛋白的功能分析奠定了基础。
我们进一步构建IL-24真核表达质粒并研究其体外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。采用重组DNA技术构建真核表达质粒pEGFP-IL24。用脂质体转染法将重组质粒及空载体外转染肿瘤细胞和正常细胞,用MTT法检测细胞的体外增殖活力;同时用激光共聚焦显微镜观察其细胞核的变化。结果表明:pEGFP-IL-24转染的肿瘤细胞体外增殖能力明显收到抑制,Hela、H460、Huh7、BEL-7404细胞均出现了增殖减缓、生长减慢等变化,而且这种变化趋势随着浓度增加而明显;而正常肝细胞株L02经pEGFP-IL-24处理后,其生长趋势无明显变化,说明IL-24蛋白不能影响正常肝细胞L02的生长增殖。荧光显微镜下观察细胞膨胀破碎,核固缩、浓缩、断裂等症状。因此,IL-24基因的表达能抑制体外肿瘤细胞的生长。